Prednosti i nedostaci višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije (MLSM)
Višefotonska laserska skenirajuća mikroskopija je eksperimentalna metoda zasnovana na tehnologiji laserske skenirajuće mikroskopije, koja pruža bolje mogućnosti optičkog sečenja za trodimenzionalno posmatranje. Metoda višefotonske ekscitacije fluorescencije koristi dugovalnu crvenu svjetlost ili blisku infracrvenu svjetlost za prikupljanje fluorescentnih slika visoke rezolucije uzoraka, što uzrokuje minimalno oštećenje živih uzoraka. Zbog toga je pogodan za snimanje živih ćelija, posebno debelih živih tkiva kao što su moždane kriške, embrioni, itd. Studije snimanja celih organa ili čak čitavih tela.
Prednosti su sljedeće:
1. Koristite crveno ili infracrveno svjetlo za uzbuđenje, a raspršivanje svjetlosti je malo (rasipanje malih čestica je obrnuto proporcionalno četvrtom stepenu talasne dužine).
2. Nije potrebna rupica i može se prikupiti više raspršenih fotona iz poprečnog presjeka slike.
3. Pinhole ne može razlikovati raspršene fotone emitovane iz defokusiranog područja ili područja fokusa, a omjer signala i šuma višefotonskog snimanja u dubokim slojevima je dobar.
4. Ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za jednofotonsko pobuđivanje lako se apsorbira i prigušuje od strane uzorka prije nego snop dostigne žižnu ravan i teško ga je pobuditi u dubokim slojevima.
5. U smislu posmatranja biološkog mikroskopa, prva pažnja je da se ne ošteti aktivno stanje samog organizma i da se održi protok vode, koncentracija jona, kiseonika i hranljivih materija. U slučaju promatranja svjetlosti, i toplina i energija fotona moraju ostati unutar količine zračenja i svjetlosne energije kako se ćelije ne bi oštetile.
6. Multifotonska mikroskopija također ima mnoge prednosti. Na primjer, u smislu trodimenzionalne rezolucije, prodora u dubinu, efikasnosti raspršenja, pozadinskog svjetla, odnosa signal-šum, kontrole, itd., postoje transcendentne karakteristike koje prethodni laserski mikroskopi nisu imali ili nisu mogli parirati.
Višefotonska konfokalna laserska skenirajuća mikroskopija proširena je na različita polja istraživanja i primjene. Može da sprovodi trodimenzionalno nedestruktivno posmatranje uzoraka u njihovom prirodnom stanju i može da poboljša rezoluciju i odnos signal-šum sistema. Korištenje multifotonskih pobudnih materijala. Promjene svojstava također mogu ostvariti trodimenzionalno skladištenje podataka o visini i trodimenzionalnu mikro-obradu u bilo kojem smjeru, što ima visoku primjenu. Vjeruje se da će daljnjim razvojem strojeva, materijala, laserske tehnologije itd. vezanih za multifotonsku konfokalnu mikroskopiju, više fotonske konfokalne laserske skenirajuće mikroskopije dobiti veći razvoj i širu primjenu.
Nedostaci su sljedeći:
1. Može samo slikati fluorescenciju.
2. Ako uzorak sadrži hromofore koji mogu apsorbirati ekscitacijsko svjetlo, kao što su pigmenti, uzorak može biti oštećen toplinom.
3. Rezolucija je malo smanjena. Iako se može poboljšati korištenjem konfokalnih rupa u isto vrijeme, doći će do gubitka signala.
4. Ograničeni skupim ultrabrzim laserima, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
