Biološki mikroskop u pogledu volumena blokova tkiva
Biološka mikroskopija Do sada, hladna fiksacija, zamrznuto ultratanko sečenje i sušenje zamrzavanjem su rutinske metode za rendgenski mikro presek tkiva i ćelija. U nastavku su detalji ove metode:
Biološki mikroskopi. Za mikroskope sa kondenzatorom, kondenzator se može pomicati gore-dolje kako bi se postigla umjerena svjetlina. Osim toga, otvor blende varijabilnih dioda koje emituju svjetlost može se promijeniti kako bi se postigla umjerena svjetlina od 9b. Ako je svjetlo jako, kondenzator se može podići na odgovarajući način i otvor promjenjivog svjetla može se na odgovarajući način povećati. Ako je svjetlo prejako, kondenzator se može na odgovarajući način spustiti i otvor snopa poprečnog svjetla može se na odgovarajući način smanjiti. Ako se i dalje osjećate zasljepljujuće u ovoj situaciji, možete odabrati odgovarajući filter i postaviti ga na nosač ispod kondenzatora. Na ovaj način možete dobiti svjetlinu koja vas zadovoljava. Naravno, potreban je određeni period prakse da se stekne iskustvo u podešavanju gore i dolje položaja kondenzatora kako bi se postigla varijabilna veličina otvora i odabir odgovarajućih filtera.
Vrlo važno pitanje u biološkoj mikroskopiji je da tokom procesa sakupljanja i odvajanja ćelija, nakon sušenja zamrzavanjem i ugradnje smole (FD), nakon zamrzavanja ultra tankih peleta i nakon sušenja zamrzavanjem, sadržaj od 65 elemenata u svakom dijelu mora analizirati vrlo pažljivo, i apsolutno Nemojte oštetiti ćelije koje se analiziraju. Jer rendgenska analiza mikro-područja ne samo da uključuje mnogo koraka, već i košta mnogo. Ako nakon dugo vremena i višestrukih koraka, analizirane ćelije budu oštećene ćelije ili mrtve ćelije, šteta bi bila izvući pogrešne zaključke. Na primjer, kardiomiociti izolirani nakon tretmana kolagenazom imaju dva oblika, jedan je u obliku duge šipke, a drugi je okrugao. Potonje su umiruće ćelije koje su oštećene tokom izolacije ćelija.
Biološka mikroskopija Sadržaj i distribucija elektrolita u ova dva tipa ćelija su veoma različiti. Na je vrlo visok, a K je vrlo nizak u okruglim kardiomiocitima, a koncentracija Ca u linearnim granama je vrlo visoka. Nakon provjere drugim metodama analize, dokazano je da su visoki Na i nizak K u okruglim stanicama i visoki ca u mitohondrijima posljedica oštećenja ćelijske membrane tokom procesa odvajanja ćelija. Metoda hladne fiksacije ćelija i tkiva često je da se prvo gase i fiksiraju, a zatim pohranjuju u tekućem dušiku. Gašenje i fiksacija su veoma važni za efekat očuvanja. Žive ćelije ili svježa tkiva su bogata vodom. Prilikom gašenja, dijelovi ćelija ili tkiva koji su u direktnom kontaktu sa kriogenom (posebno kada su gašeni tečnim azotom) se prvo zamrzavaju i fiksiraju, formirajući tako „ljusku“, koja otežava centralni dio ćelije. i hladno fiksiran. Stoga, kada se radi analiza mikro-područja X-line, često se otkrije da se u centru većih ćelija nalaze kristali leda. Kako bi se to spriječilo, kao usitnjeno rashladno sredstvo koristi se supstanca sa višom tačkom topljenja od tekućeg dušika, ali nižom suhoćom od -806c. Takvih supstanci ima mnogo, ali najjednostavniji i najjeftiniji je koncentrirani propan (tačka ključanja - 42.120c, tačka topljenja - 187.10c, molekulska masa 44.1), a brzina hlađenja je takođe najbrža. Ali njegov nedostatak je što je zapaljiv.
Biološki mikroskop može staviti mišićno vlakno na poseban okvir. Kada kontrakcija mišićnog vlakna dostigne određenu fazu i treba je fiksirati, mlaznica se odmah pokreće da prska tekući propan na mišićno vlakno da ga ugasi i popravi. Zatim su mišićna vlakna zajedno sa okvirom izvađena i stavljena u tečni azot. Ako su krvne ćelije ili odvojene ćelije fiksirane, prvo centrifugirajte malom brzinom da biste koncentrirali ćelije, prebacite ćelije u malu srebrnu epruvetu sa dobrom toplotnom provodljivošću, stavite epruvetu u tečni propan i zamrznite da biste je fiksirali. Prilikom fiksiranja pankreasa štakora u laboratoriju Hall, prvo prethodno ohladite dva čelična bloka tekućim helijumom (ili tekućim dušikom), stegnite dva bakrena bloka pincetom i postavite ih prije i poslije gušterače kako biste ugasili i fiksirali žlijezdu maternice. . Tkiva ili ćelije se mogu ugasiti i fiksirati, a zatim prenijeti u tečni dušik za dugotrajno skladištenje.
