Poređenje konfokalnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa
Mikroskop je glavni alat za posmatranje ćelija. Ovisno o izvoru svjetlosti, može se podijeliti u dvije kategorije: optički mikroskop i elektronski mikroskop. Prvi koristi vidljivo svjetlo (ultraljubičasti mikroskop do ultraljubičastog svjetla) kao izvor svjetlosti, dok drugi koristi snop elektrona kao izvor svjetlosti. Obični optički mikroskop i laserski konfokalni mikroskop pripadaju istom optičkom mikroskopu.
I. Opšti optički mikroskop
Obični biološki mikroskop se sastoji od tri dijela, i to: ① sistema osvjetljenja, uključujući izvor svjetlosti i kondenzator; ② sustav optičkog povećanja, koji se sastoji od objektiva i okulara, glavni je dio mikroskopa, kako bi se eliminirala sferna aberacija i kromatska aberacija, okulari i objektivi su sastavljeni od složene grupe sočiva; ③ mehanički uređaj, koji se koristi za fiksiranje materijala i praćenje praktičnosti.
Objekt mikroskopa je jasan ne samo određen povećanjem, već i sa rezolucijom mikroskopa (rezolucijom), moć razlučivanja se odnosi na mikroskop (ili ljudsko oko od mete 25cm) može razlikovati objekt zui u malim intervalima sposobnosti da razlikovati veličinu moći razlučivanja određena je talasnom dužinom svjetlosti i brzinom usta zrcala i indeksom prelamanja medija, izraženim u formuli:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 gdje je: n=indeks prelamanja medija;=ugao ušća ogledala (uzorak na otvoru sočiva objektiva ugao napetosti), NA=brzina usta zrcala (numerički otvor). Ugao otvora ogledala uvijek treba biti manji od 180°, tako da je zui vrijednost sina/2 nužno manja od 1.
Indeks loma stakla koji se koristi u proizvodnji optičkih leća je 1,65 ~ 1,78, indeks prelamanja medija koji se koristi što je bliže staklu, to bolje. Za suva sočiva objektiva, medij za zrak, brzina zrcala je općenito 0.05 ~ 0,95; uljna leća sa kedrovim uljem kao medij, brzina zrcala može biti blizu 1,5.
Uobičajena svjetlosna talasna dužina od 400~700nm, tako da vrijednost snage razlučivanja mikroskopa neće biti manja od 0,2 μm, moć razlučivanja ljudskog oka je 0,2 mm, tako da je opći dizajn mikroskopa zui uvećanje je obično 1000X.
Drugo, laserski konfokalni skenirajući mikroskop
Laserski konfokalni skenirajući mikroskop (laserski konfokalni skenirajući mikroskop), s laserom kao skenirajućim izvorom svjetlosti, tačku po tačku, liniju po liniju, površinu po površinu, brzo skeniranje slike, skenirajući laser i fluorescentnu kolekciju zajedničkog objektiva, objektivno skenirajuće lasersko fokusiranje , ali i trenutno snimanje tačke objekta. Zbog kraće talasne dužine laserskog snopa, snop je vrlo fin, tako da konfokalni laserski skenirajući mikroskop ima visoku rezoluciju, oko 3 puta veću od običnog optičkog mikroskopa. Sistem je fokusiran jednom i skeniranje je ograničeno na jednu ravan uzorka. Kada dubina fokusiranja nije ista, mogu se dobiti slike različitih nivoa dubine uzorka, a te informacije o slici se pohranjuju u kompjuter, putem kompjuterske analize i simulacije, može prikazati trodimenzionalnu strukturu uzorka ćelije. .
