Razlike i prednosti i nedostaci između transmisione fluorescentne mikroskopije i refleksijske fluorescentne mikroskopije
1. Transmisioni fluorescentni mikroskop: Izvor ekscitacije svjetlosti se prenosi kroz materijal uzorka kroz kondenzator da pobuđuje fluorescenciju. Uobičajeni koncentratori tamnog polja, ili obični koncentratori, mogu se koristiti za podešavanje reflektora za pretvaranje pobudnog i bočnog svjetla na uzorak. Ovo je relativno staromodan fluorescentni mikroskop. Njegova prednost je jaka fluorescencija pri malom uvećanju, dok je nedostatak što fluorescencija slabi sa povećanjem povećanja. Stoga je bolje posmatrati veće materijale uzoraka.
2. Fluorescencijski mikroskop sa padajućim snopom: Ovo je novi tip fluorescentnog mikroskopa koji se razvio u moderno doba. Za razliku od prethodnog, ekscitacijsko svjetlo pada sa sočiva objektiva na površinu uzorka, koristeći isto sočivo objektiva kao i kondenzator osvjetljenja i objektiv objektiva za prikupljanje fluorescencije. Dvobojni separator snopa treba dodati optičkoj putanji, koja formira ugao od 45 stepeni sa fotouranijumom. Ekscitacijsko svjetlo se reflektira u sočivo objektiva i skuplja se na uzorku. Fluorescencija koju generiše uzorak i ekscitaciono svetlo koje se reflektuje od površine sočiva objektiva i pokrivnog stakla istovremeno ulaze u sočivo objektiva i vraćaju se u separator snopa dvostruke boje, odvajajući ekscitaciono svetlo i fluorescenciju. Filter za blokiranje apsorbuje preostalo pobudno svjetlo. Ako se koriste različite kombinacije ekscitacionih filtera, separatora snopa s dvije boje i filtera za blokiranje, one mogu zadovoljiti potrebe različitih fluorescentnih reakcijskih proizvoda. Prednosti ovog fluorescentnog mikroskopa su jednolično osvetljenje vidnog polja, jasna slika i jača fluorescencija sa većim uvećanjem.
Prednosti i nedostaci transmisione fluorescentne mikroskopije
Izvor svjetlosti: Živina sijalica visokog pritiska ili halogena lampa.
Reflektor: Upotreba reflektora tamnog polja za razdvajanje ekscitacije i fluorescencije.
Objektivna sočiva: Može se koristiti bilo koja vrsta objektiva.
Uzorak: Tanki uzorci su pogodniji za posmatranje transmisije.
Prednosti: ① Zbog upotrebe kondenzatora tamnog polja, pobudna svjetlost ne može ući u objektiv objektiva, što olakšava formiranje tamne pozadine i postizanje dobrog kontrasta, a bilo koje objektivno sočivo može se koristiti za posmatranje. ② Kada koristite objektiv sa malim uvećanjem, on je svjetliji od reflektivnog fluorescentnog mikroskopa.
Nedostatak: Centar i visina reflektora moraju biti pravilno podešeni, inače se ne može dobiti svijetla fluorescentna slika. Zbog ograničenja žižne daljine reflektora tamnog polja, dijapozitivi od debelog stakla se ne mogu koristiti. Područje osvjetljenja vidnog polja ne smije biti preveliko, u suprotnom može uzrokovati blijedi fluorescentna boja fluorescentnog uzorka. Debeli ili neprozirni uzorci nisu prikladni.
Prednosti i nedostaci reflektivne fluorescentne mikroskopije
Izvor svjetlosti: Živina sijalica visokog pritiska ili halogena lampa.
Sočivo za fokusiranje: Kako objektiv objektiva služi kao sočivo za fokusiranje, nema potrebe za sočivom za fokusiranje.
Objektivna sočiva: Objektivna sočiva koja se koriste moraju biti sposobna da prenesu dovoljno ultraljubičastog svjetla i ne proizvode samu fluorescenciju, bez ograničenja na numerički otvor.
Uzorak: Mogu se uočiti i debeli i neprozirni uzorci.
Prednosti: ① Kako sočivo objektiva služi i kao reflektor, ne zahtijeva mnogo podešavanja. ② Korištenjem Kolar metode osvjetljenja, mogu se iskoristiti efekti otvora blende i otvora vidnog polja. Numerički otvor objektiva nije ograničen, a slike visoke rezolucije mogu se dobiti i pri velikom povećanju. Debeli ili neprozirni uzorci također se mogu dobiti opaženo, a mogu se koristiti i debele pokrivne pločice. Druge metode posmatranja se takođe mogu kombinovati sa reflektovanom fluorescencijom, posebno sa metodom fazne razlike i metodom diferencijalne interferencije u transmisiji. Može izbjeći nepotreban fenomen blijeđenja boje fluorescencije.
Nedostatak: Kada se koristi objektiv za uvećanje na zemlji, slika je relativno tamna, tako da se mora koristiti objektiv sa velikim numeričkim otvorom blende. Sistem filtera mora efikasno odvojiti luminescenciju pobude i fluorescenciju.,
