Metoda direktnog brojanja mikroorganizama pomoću mikroskopa
Upotreba hemocitometra za direktno brojanje mikroorganizama pod mikroskopom je uobičajena metoda za brojanje mikroba. Prednost ove metode je njena intuitivnost i brzina. Stavite odgovarajuće razrijeđenu suspenziju bakterija (ili suspenziju spora) u komoru za brojanje između stakalca za hemocitometar i poklopnog stakla i izbrojite pod mikroskopom. Zbog konstantne zapremine prostorije za brojanje (0,1 mm2), ukupan broj mikroorganizama po jedinici zapremine može se pretvoriti na osnovu broja mikroorganizama posmatranih pod mikroskopom. Zbog činjenice da ova metoda izračunava zbir živih i mrtvih bakterijskih ćelija, poznata je i kao metoda ukupnog broja bakterija.
Ploča za brojanje krvnih zrnaca obično je posebno dizajnirana staklena pločica s četiri žljebove koji formiraju tri platforme. Srednja platforma je prepolovljena kratkim horizontalnim žlijebom, a na svakoj strani platforme je urezana mreža. Svaka mreža je podijeljena na devet velikih kvadrata, a veliki kvadrat u sredini je soba za brojanje, gdje se vrši brojanje mikroba. Struktura ploče za brojanje krvnih zrnaca prikazana je na slici VIII-1.
Generalno, postoje dvije specifikacije za skalu sobe za brojanje. Jedan je da je veliki kvadrat podijeljen na 16 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je dalje podijeljen na 25 malih kvadrata (slika VIII-2); Drugi metod je da se veliki kvadrat podeli na 25 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat se dalje deli na 16 malih kvadrata (slika VIII-1, C). Ali bez obzira na veličinu ploče za brojanje, broj malih kvadrata u svakom velikom kvadratu je isti, odnosno 16 × 25=400 malih kvadrata, kao što je prikazano na slici VIII-2.
Ako je dužina stranice svakog velikog kvadrata 1 mm, površina svakog velikog kvadrata je 1 mm2. Nakon prekrivanja pokrivnim staklom, visina između tobogana i poklopnog stakla je 0,1 mm, tako da je zapremina sobe za brojanje 0,1 mm3.
Prilikom brojanja obično se broji ukupan broj bakterija u pet kvadrata, a zatim se dobije prosječna vrijednost svakog kvadrata. Množenjem sa 16 ili 25 dobiva se ukupan broj bakterija u velikom kvadratu, koji se zatim pretvara u ukupan broj bakterija u 1 ml bakterijske otopine.
