Eksperimentalni principi metode direktnog brojanja mikrobne mikroskopije
Direktno brojanje pod mikroskopom pomoću hemocitometra je uobičajena metoda za brojanje mikroorganizama. Prednost ove metode je što je intuitivna i brza. Stavite odgovarajuće razrijeđenu bakterijsku suspenziju (ili suspenziju spora) u komoru za brojanje između stakalca i pokrovnog stakla hemocitometra i izbrojite pod mikroskopom. Pošto je zapremina komore za brojanje fiksna (0.1 mm2), može se pretvoriti u ukupan broj mikroorganizama po jedinici zapremine na osnovu broja mikroorganizama posmatranih pod mikroskopom. Budući da ova metoda broji ukupan broj živih i mrtvih bakterija, naziva se i metoda ukupnog broja bakterija.
Hemocitometar je obično poseban tobogan sa četiri proreza koji formiraju tri platforme. Srednja platforma je kratkim horizontalnim žlijebom podijeljena na dvije polovine. Na platformi je sa svake strane ugravirana kvadratna mreža. Svaka kvadratna mreža podijeljena je na devet velikih kvadrata. Veliki kvadrat u sredini je soba za brojanje. Brojanje mikroorganizama se odvija u komori za brojanje. Struktura hemocitometra je prikazana na slici Ⅷ-1.
Skala komore za brojanje općenito ima dvije specifikacije. Jedan je veliki kvadrat podijeljen na 16 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 25 malih kvadrata (slika Ⅷ-2); drugi je veliki kvadrat. Kvadratna mreža je podijeljena na 25 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 16 malih kvadrata (slika VIII-1, C). Ali bez obzira o kojoj se ploči za brojanje radi, broj malih kvadrata u svakom velikom kvadratu je isti, odnosno 16×25=400 malih kvadrata, kao što je prikazano na slici Ⅷ-2.
Dužina stranice svakog velikog kvadrata je 1 mm, tako da je površina svakog velikog kvadrata 1 mm2. Nakon što je pokrovno staklo pokriveno, visina između tobogana i pokrivnog stakla je 0.1mm, tako da je zapremina komore za brojanje 0.1mm3.
Kada brojite, obično izbrojite ukupan broj bakterija u pet srednjih kvadrata, zatim pronađite prosječnu vrijednost svakog srednjeg kvadrata, a zatim pomnožite sa 16 ili 25 da biste dobili ukupan broj bakterija u velikom kvadratu, a zatim izračunajte Pretvori u ukupan broj bakterija u 1 ml bakterijske otopine.
