Jeste li ikada razumjeli osnovne principe faznokontrastne mikroskopije?
Mikroskop faznog kontrasta izumio je holandski naučnik Zernike 1935. za posmatranje neobojenih uzoraka. Za žive ćelije i neobojene biološke uzorke, zbog razlike u indeksu loma i debljini mikrostrukture svakog dela ćelije, kada svetlosni talas prođe kroz njega, talasna dužina i amplituda se ne menjaju, menja se samo faza (amplituda razlika ), koja je nevidljiva ljudskom oku. posmatrati. Mikroskop faznog kontrasta mijenja faznu razliku i koristi difrakciju svjetlosti i fenomene interferencije kako bi promijenio faznu razliku u razliku amplitude za promatranje živih ćelija i neobojenih uzoraka. Razlika između faznog kontrastnog mikroskopa i običnog mikroskopa je u tome što se umjesto promjenjive dijafragme koristi prstenasta dijafragma, umjesto običnog sočiva objektiva sa faznom pločom, a predviđen je i teleskop za koaksijalnost.
Osnovni principi faznokontrastne mikroskopije:
Koristeći razliku u indeksu prelamanja i debljini između različitih strukturnih komponenti objekta, razlika optičkog puta koja prolazi kroz različite dijelove objekta pretvara se u razliku amplitude (intenziteta svjetlosti), te kroz kondenzatorsko sočivo s prstenastom dijafragmom i fazna razlika sa faznom pločom Sočivo objektiva realizuje posmatrački mikroskop. Uglavnom se koristi za posmatranje živih ćelija ili neobojenih delova tkiva, a ponekad se može koristiti i za posmatranje obojenih uzoraka kojima nedostaje kontrast.
Optička razlika putanje vidljive svjetlosti koja prolazi kroz uzorak mijenja se u razliku amplitude, čime se poboljšava kontrast između različitih struktura i čine različite strukture jasno vidljivim. Svjetlost se lomi nakon prolaska kroz uzorak, odstupa od prvobitne optičke putanje i kasni za 1/4λ (talasna dužina). Ako se poveća ili smanji za 1/4λ, razlika optičkog puta postaje 1/2λ, a dva snopa interferiraju nakon osi svjetlosti. Pojačati, povećati ili smanjiti amplitudu, poboljšati kontrast.
Mikroskop s faznim kontrastom ima dvije funkcije koje drugi mikroskopi nemaju: ① odvaja direktnu svjetlost (pozadinsko svjetlo u vidnom polju) od svjetlosti koju difrakuje objekt; ② uklanja otprilike polovinu valne dužine iz faze tako da ne može stupiti u interakciju, što rezultira promjenom intenziteta.
