Kako odabrati pravi fluorescentni mikroskop
Fluorescentni mikroskop je standardna oprema za mikroskopsko snimanje za laboratorije i odjele za patologiju. Koristi karakteristike fluorescencije za posmatranje i snimanje. Široko se koristi u ćelijskoj biologiji, neurobiologiji, botanici, mikrobiologiji, patologiji, genetici i drugim poljima. Fluorescentno snimanje ima prednosti visoke osjetljivosti i visoke specifičnosti, te je vrlo pogodno za promatranje distribucije specifičnih proteina i organela u tkivima i stanicama, proučavanje kolokalizacije i interakcije, praćenje životnih dinamičkih procesa kao što su promjene koncentracije jona. , itd.
Izbor mikroskopa
Fluorescencijski mikroskopi se uglavnom dijele u tri kategorije: uspravni fluorescentni mikroskopi (pogodni za sečenje), invertirani fluorescentni mikroskopi (pogodni za žive ćelije, uzimajući u obzir sečenje), stereoskopski fluorescentni mikroskopi (prikladni za veće uzorke, kao što su biljke, zebrice (odrasle/ embrion), medaka, organi miša/pacova, itd.).
Izbor fluorescentnih filter kocki
Pored razmatranja talasnih dužina ekscitacije i emisije fluorescentnih sondi, izbor blokova filtera takođe treba da razmotri da li postoji nespecifična ekscitacija i unakrsna boja za višebojno označene uzorke. U eksperimentu ćemo pokušati da izaberemo talasnu dužinu koja je najbliža ekscitacijskom vrhuncu za pobudu, a opseg prijema mora uključivati i emisioni vrh. Na primjer, ekscitacijski vrh Alexa Fluor 488 je 500 nm, a filter ekscitacije 480/40 može se odabrati u fluorescentnom mikroskopu. Fluorescentne filter kocke koje se obično koriste u fluorescentnim mikroskopima mogu se podijeliti u dva tipa: dugopropusni (LP za kratki) i band pass (BP za kratki), koje također treba odabrati prema potrebama.
Izbor fluorescentnog izvora svjetlosti
Trenutno korišćeni fluorescentni izvori svetlosti uključuju živine lampe, metal-halogene lampe i LED izvore svetlosti koji su se brzo razvili poslednjih godina. Spektar fluorescentnog izvora svjetlosti je kontinuiran i diskontinuiran, a energija će biti različita u različitim opsezima. Zbog svog relativno uskog spektralnog pojasa, stabilnijeg izlaza energije, dugog vijeka trajanja, sigurnosti i zaštite okoliša i mnogih drugih prednosti, LED izvor svjetlosti postepeno postaje glavni izvor svjetlosti fluorescentnog mikroskopa.
konfokalni mikroskop
U tradicionalnom posmatranju fluorescentnog mikroskopa, zbog preklapanja fluorescentnih markerskih supstanci i autofluorescentnih struktura, oni su blisko kombinovani, dok sočivo objektiva tradicionalnog epifluorescentnog mikroskopa ne samo da prikuplja svjetlost iz žarišne ravni, već prikuplja i raspršenu svjetlost iznad i ispod žižna ravan, što rezultira značajno smanjenom rezolucijom i kontrastom slike.
Konfokalno snimanje rješava ovaj problem tako što detektuje samo dio svjetlosti koji se reflektira iz fokalne ravni. Izvor svjetlosti prolazi kroz rupicu i formira malu i finu svjetlosnu tačku na fokalnoj ravni. Svjetlost koja se emituje iz fokalne ravni prikuplja se sočivom objektiva. Većina fluorescencije koja se emituje iz tačke iznad ili ispod fokalne ravni objektivnog sočiva ne može konvergirati do male rupe. Samo fluorescencija koja se nalazi u fokalnoj ravni i mali dio fluorescencije van fokusa mogu proći kroz rupicu, dok se svjetlosni snopovi izvan fokalne ravni konvergiraju na prednjoj ili stražnjoj strani pinhole ploče i blokirani su od ulaska u detektor kroz rupicu. Detektovana slika je slika iz fokalne ravni, tako da je konačni kvalitet slike znatno poboljšan.
Zbog prednosti i praktičnosti funkcija laserskog skenirajućeg konfokalnog mikroskopa, konfokalni mikroskop je nezamjenjiv eksperimentalni asistent u području precizne stanične biologije, botanike i istraživanja stanica. Istovremeno, u budućem naučno-istraživačkom centru, to će biti najosnovnije i najosnovnije naučno istraživačko sredstvo.
