Poboljšane prednosti laserskog skeniranja multifotonske mikroskopije
Laserska skenirajuća multifotonska mikroskopija je veliko poboljšanje optičke mikroskopije, uglavnom za posmatranje duboke strukture živih ćelija, fiksnih ćelija i tkiva, i može dobiti jasne i oštre višeslojne Z-ravninske strukture, odnosno optičke rezove, i može konstruisati Trodimenzionalna čvrsta struktura uzorka. Konfokalni mikroskop koristi laserski izvor svjetlosti, koji se širi da ispuni cijelu stražnju žarišnu ravan sočiva objektiva, a zatim konvergira u vrlo malu tačku na fokalnoj ravni uzorka kroz sistem sočiva objektivnog sočiva. U zavisnosti od numeričkog otvora sočiva objektiva, prečnik najsjajnije tačke osvetljenja je oko 0.25 ~ 0.8 μm, a dubina je oko 0.5 ~ 1.5 μm. Veličina konfokalne tačke zavisi od dizajna mikroskopa, talasne dužine lasera, karakteristika sočiva objektiva, podešavanja stanja jedinice za skeniranje i prirode uzorka. Terenski mikroskopi imaju veliki raspon i dubinu osvjetljenja, dok konfokalni mikroskopi imaju osvjetljenje koncentrisano na žarišnu tačku na fokalnoj ravni. Najosnovnija prednost konfokalne mikroskopije je da može izvršiti fino optičko sečenje debelih fluorescentnih uzoraka (do 50 μm ili više), debljine od oko 0,5 do 1,5 μm. Niz slika optičkog preseka može se dobiti pomeranjem uzorka gore-dole pomoću koračnog motora mikroskopa Z-ose. Prikupljanje informacija o slici kontroliše se unutar precizne ravni i neće biti ometano signalima sa drugih lokacija na uzorku. Nakon uklanjanja efekta pozadinske fluorescencije i povećanja odnosa signal-šum, kontrast i rezolucija konfokalnih slika su značajno poboljšani u poređenju sa tradicionalnim fluorescentnim slikama osvetljenja polja. U mnogim uzorcima mnoge zamršene strukturne komponente su isprepletene u složene sisteme, ali kada se prikupi dovoljno optičkih sekcija, možemo ih rekonstruisati u 3D pomoću softvera. Ovaj eksperimentalni pristup se široko koristi u biološkim istraživanjima kako bi se razjasnili složeni strukturni i funkcionalni odnosi između stanica ili tkiva.
