Poboljšanja u laserskom skeniranju Multipoton mikroskopije
Lasersko skeniranje Multipotonsko mikroskop je značajno poboljšanje optičke mikroskopije, uglavnom se očituje u mogućnosti da se promatra duboke strukture živih ćelija, fiksnih ćelija i pribavljanja jasne i oštre višeslojne z-ravnine, naime optičke kriške, koje se mogu koristiti za izgradnju trodimenzionalnih čvrstih struktura uzoraka. Confocal Microskop koristi laserski izvor svjetlosti, koji se proširuje da bi ispunio cijelu žarišnu ravninu objektivnih objektiva, a zatim se konvergiraju u vrlo male točke na žarišnu ravninu uzorka kroz objektivni objektiv. Prema numeričkom otvoru objektivnog objektiva, promjer vedrog osvjetljenja je oko 0. 25-0. 8 μ m, a dubina je oko 5-1. 5 μ m. Veličina konfokalne točke određuje se dizajnom mikroskopa, laserskim talasnim dužinama, objektivnim karakteristikama, postavkama stanja skeniranja i svojstva uzorkama. Raspon osvjetljenja i dubina polja mikroskopa su veliki, dok je osvjetljenje konfokalnog mikroskopa fokusiran na žarišnu tačku na žarišnu ravninu. Osnovna prednost konfokalne mikroskopije je da može izvršiti finu optičko presjeka na debelim fluorescentnim uzorcima (do 5 0 μ m ili više), sa debljinom od oko 0,5 do 1,5 μ m. Slike optičkih kriške serije mogu se dobiti pomicanjem uzorka gore i dolje pomoću mikroskopa Z-osip motora. Zbirka podataka o slikama se kontrolira unutar aviona i neće se miješati signali koji se emitiraju iz drugih pozicija na uzoru. Nakon uklanjanja utjecaja pozadinske fluorescencije i povećanje omjera signala i buke, kontrast i rješavanje konfokalnih slika značajno se poboljšavaju u odnosu na tradicionalno osvjetljenje fluorescentne slike. U mnogim uzorcima zamršene strukturne komponente isprepletene za formiranje složenih sistema, ali nakon što se mogu prikupiti dovoljno optičkih presjeka, možemo koristiti softver za rekonstrukciju u tri dimenzije. Ova eksperimentalna metoda široko se koristi u biološkom istraživanju kako bi se smanjili složeni strukturni i funkcionalni odnosi između ćelija ili tkiva.
