Uvod u prednosti i nedostatke višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije
1. Koristeći crveno ili infracrveno svjetlo za uzbuđenje, raspršivanje svjetlosti je malo, a raspršivanje malih čestica je obrnuto proporcionalno četvrtom stepenu talasne dužine.
2. Više rasutih fotona iz poprečnog presjeka slike može se prikupiti bez potrebe za rupicama.
3. Pinhole ne može razlikovati raspršene fotone emitovane iz defokusiranog područja ili područja fokusa, a omjer signala i šuma višefotonskog snimanja u dubokim slojevima je dobar.
4. Ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za jednofotonsko pobuđivanje lako se apsorbira i prigušuje od strane uzorka prije nego snop dostigne žižnu ravan i teško ga je pobuditi u dubokim slojevima.
5. U smislu posmatranja biološkog mikroskopa, prva pažnja je da se ne ošteti aktivno stanje samog organizma i da se održi protok vode, koncentracija jona, kiseonika i hranljivih materija. U slučaju promatranja svjetlosti, i toplina i energija fotona moraju ostati unutar količine zračenja i svjetlosne energije kako se ćelije ne bi oštetile.
6. Multifotonska mikroskopija ima mnoge prednosti. Kao što su trodimenzionalna rezolucija, dubinska penetracija, efikasnost raspršenja, pozadinsko svjetlo, omjer signala i šuma, kontrola, itd., svi imaju karakteristike koje prethodni laserski mikroskopi nisu imali ili s kojima se nisu mogli uporediti.
Nedostaci višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije:
1. Može samo slikati fluorescenciju.
2. Ako uzorak sadrži hromofore koji apsorbuju pobudnu svjetlost, uzorak može biti termički oštećen.
3. Rezolucija je malo smanjena. Iako se može poboljšati korištenjem konfokalnih rupa u isto vrijeme, postoji gubitak signala.
4. Ograničeni skupim ultrabrzim laserima, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
