Prednosti i nedostaci višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije
Višefotonska laserska skenirajuća mikroskopija je eksperimentalna metoda zasnovana na tehnologiji laserske skenirajuće mikroskopije koja pruža preciznije mogućnosti optičkog sečenja u 3D gledanju. Metoda višefotonske ekscitacije fluorescencije koristi duge valne dužine crvene ili bliske infracrvene svjetlosti za dobivanje fluorescentnih slika visoke rezolucije uzoraka uz minimalno ubijanje aktivnih uzoraka, što ga čini pogodnim za snimanje živih stanica, posebno debelih živih tkiva kao što su moždane kriške, embriji, cijelih organa, pa čak i cijelih organizama.
Prednosti su sljedeće:
1, korištenje crvenog svjetla ili infracrvenog svjetla pobuđivanja, raspršivanje svjetlosti je malo (rasipanje malih čestica i valna duljina četvrte snage inverznog omjera).
2, ne zahtijeva rupicu, može prikupiti više raspršenih fotona iz poprečnog presjeka slike.
3, rupica ne može napraviti razliku između raspršenih fotona koje emituje područje izvan fokusa ili fokusno područje, višefotonski u dubokoj slici omjer signal-šum je dobar.
4, jednofotonsko pobuđivanje ultraljubičastog ili vidljivog svjetla koje se koristi u snopu za postizanje žarišne ravni prije nego što se uzorak lako apsorbira i priguši, nije lako do dubokog pobuđenja.
5, u promatranju biološkog mikroskopa, * prva pažnja je da se ne ošteti aktivno stanje samog organizma, da se održi voda, koncentracija iona, cirkulacija kisika i hranjivih tvari. U prilikama posmatranja svjetlosti, i toplinska i fotonska energija moraju ostati u ćeliji bez oštećenja količine zračenja, svjetlosne energije.
6, multifotonski mikroskop također ima mnoge prednosti. Kao što su trodimenzionalna rezolucija, dubinska intruzija, efikasnost raspršenja, pozadinsko svjetlo, omjer signal-šum, kontrola, itd., postoje prethodni laserski mikroskopi koje nemaju ili imaju neuporedivo izvan karakteristika.
Višefotonski konfokalni laserski skenirajući mikroskop proširen je na različita polja istraživanja i primjene. On je sposoban za trodimenzionalno nedestruktivno posmatranje uzoraka u njihovom prirodnom stanju i može poboljšati rezoluciju i odnos signal-šum sistema. Koristeći promjenu svojstava materijala nakon višefotonske pobude, također je moguće postići trodimenzionalno skladištenje podataka o visini i trodimenzionalnu mikrofabrikaciju u bilo kojem smjeru, što ima visoku primjenu. Može se vjerovati da će daljim razvojem strojeva, materijala, laserske tehnologije i drugih tehnologija vezanih za multifotonsku konfokalnu mikroskopiju, multifotonski konfokalni laserski skenirajući mikroskop biti sve veći razvoj i šira primjena.
Nedostaci su sljedeći:
1, samo fluorescentno snimanje.
2, ako uzorak sadrži hromofore koji mogu apsorbirati pobuđujuću svjetlost, kao što su pigmenti, uzorak može biti termički oštećen.
3, rezolucija je neznatno smanjena, iako se može poboljšati istovremenom upotrebom konfokalne blende, ali će doći do gubitka signala.
4. Cijena višefotonske skenirajuće mikroskopije je visoka zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera.
