Priprema i posmatranje bioloških uzoraka za elektronsku mikroskopiju
Rezolucija mikroskopa zavisi od talasne dužine korišćene svetlosti, elektronski mikroskop se počeo pojavljivati 1933. godine zbog upotrebe mnogo kraće talasne dužine od vidljive svetlosti elektronskog snopa kao izvora svetlosti, tako da je rezolucija može postići nego što je optički mikroskop znatno poboljšan. Različiti izvor svjetlosti također određuje niz razlika između elektronskog mikroskopa i optičkog mikroskopa.
U skladu sa razlikama u principu snimanja elektronskog snopa i ulozi uzorka na različite načine, moderni elektronski mikroskop je razvijen da formira više tipova, trenutno * najčešće se koriste transmisioni elektronski mikroskop i skenirajući elektron mikroskop, prvi može biti u rasponu od 1,000-1,000,000 puta ukupnog povećanja raspona promjena, drugi može biti u ukupnom uvećanju { {4}},000 puta ukupno povećanje promjena između. Ovaj eksperiment se fokusira na pripremu uzoraka za dvije vrste mikroskopa, transmisioni elektronski mikroskop i skenirajući elektronski mikroskop.
Materijali
1. Procijedite Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) koso.
2. Rastvori ili reagensi Amil acetat, koncentrovana sumporna kiselina, bezvodni etanol, sterilna voda, 2% natrijum fosfovolframna kiselina (pH 6.5-8.0) vodeni rastvor, 0.3% rastvor polivinil formaldehida (rastvoren u triklorometanu), citokrom c, amonijum acetat, plazmid pBR322.
3. Instrumenti ili drugi pribor Običan optički mikroskop, bakarna mreža, porculanski lijevak, čaša, ravna posuda, sterilna bireta, sterilna pinceta, lanceta, stakalca, ** ploča za brojanje, vakuumska mašina za oblaganje, sušilica za kritičnu tačku i tako dalje.
Koraci operacije
(I) Priprema uzorka i posmatranje transmisione elektronske mikroskopije
1. Tretman metalne mreže
Uzorci za optičku mikroskopiju stavljaju se na stakalce radi posmatranja. Međutim, u transmisijskoj elektronskoj mikroskopiji, budući da elektroni ne mogu prodrijeti kroz staklenu ploču, kao nosač se može koristiti samo mrežasti materijal, koji se obično naziva mreža nosača. Noseća mreža se može podijeliti na mnogo različitih specifikacija zbog različitih materijala i oblika, od kojih je * najčešće korištena bakarna mreža 200-400 (broj rupa). Bakarnu mrežu treba tretirati prije upotrebe kako bi se uklonila prljavština na njoj i održala čistom, inače će utjecati na kvalitetu potpornog filma i jasnoću fotografija uzorka. Bakarna mreža koja se koristi u ovom eksperimentu je 400 mesh, koja se može tretirati na sljedeći način: prvo je izbjeliti amil acetatom nekoliko sati, zatim je nekoliko puta isprati destiliranom vodom, a zatim izbjeliti u bezvodnom etanolu. dehidracija. Ako bakarna mrežica gore navedenom metodom još uvijek nije čista, može se koristiti za razrjeđivanje koncentrovane sumporne kiseline (1:1) uronjena u 1-2 minute ili u 1% otopini NaOH kuhana nekoliko minuta, isprana nekoliko puta destiliranom vodom , stavljen u dehidrataciju bezvodnog etanola, koji će se koristiti.
2. Priprema potpornog filma
U promatranju uzorka, u mreži nosača također treba biti prekriven slojem nestrukturiranog, jednolikog filma, inače će mali uzorci iscuriti iz rupa u mreži nosača, ovaj sloj filma se obično naziva potporni film ili noseći film. Noseći film bi trebao biti proziran za elektrone, a njegova debljina općenito bi trebala biti manja od 20 nm; pod utjecajem elektronskog snopa, film također treba imati određeni stupanj mehaničke čvrstoće, može održati stabilnost strukture i ima dobru toplinsku provodljivost; osim toga, potporna mreža ne bi trebala imati vidljivu strukturu pod elektronskim mikroskopom, i nema kemijske reakcije s uzorkom koji se nosi, i ne ometa promatranje uzorka, a njegova debljina je općenito oko 15 nm. Noseći film može biti napravljen od plastične folije (npr. vatrogasna pamučna folija, polietilen formaldehidna folija, itd.), karbonske folije ili metalne folije (npr. berilijum folija, itd.). U rutinskim uslovima rada, zahtjevi se mogu ispuniti plastičnom folijom, dok je priprema plastične folije u vatropamučnoj ljepljivoj foliji relativno laka, ali čvrstoća nije tako jaka kao polietilen formaldehidna folija.
