Nekoliko napomena i savjeta za korištenje faznokontrastne mikroskopije
Upotreba fazne kontrastne mikroskopije
1) Instalirajte fazni kontrastni uređaj: uklonite kondenzatorsko sočivo običnog mikroskopa i instalirajte kondenzatorsko sočivo sa prstenastom dijafragmom na odgovarajući mikroskop; uklonite obično sočivo objektiva mikroskopa i zamijenite ga sočivom objektiva s faznom pločom; zamijenite okular sa Fokusirajućim okularima za fazno kontrastne mikroskope; posebni zeleni filteri (ponekad nisu potrebni) postavljaju se na svjetlosnom ulazu izvora svjetlosti.
2) Poravnanje svjetla i fokus: Podesite okular za fokusiranje i vijak za podešavanje debljine sve dok se bijeli krug i crni krug ne mogu jasno vidjeti u vidnom polju. Crni krug je fiksiran, a bijeli krug se može pomicati podešavanjem zavrtnja na kondenzatorskom uređaju, tako da se crni krug i bijeli krug potpuno poklapaju. Skinite okular za fokusiranje i zamijenite ga originalnim okularom mikroskopa da provjerite.
Analiza problema u upotrebi faznog kontrastnog mikroskopa
1. Utjecaj debljine uzorka Kada se vrši promatranje faznog kontrasta, debljina uzorka treba biti 5 μm ili tanja. Kada se koristi deblji uzorak, gornji sloj uzorka je vrlo jasan, ali duboki sloj će biti zamagljen i uzrokovati smetnje faznog pomaka. i rasipanje svetlosti.
2. Utjecaj pokrovnog stakla i kliznog stakla Uzorak mora biti prekriven pokrivnim staklom, inače svijetli prsten prstenaste dijafragme i tamni prsten fazne ploče teško se preklapaju. Promatranje faznog kontrasta također ima visoke zahtjeve u pogledu kvaliteta stakla kliznog stakla i pokrovnog stakla. Kada postoje ogrebotine, nejednaka debljina ili neravnina, pojavit će se izobličenje svijetlog prstena i smetnje u fazi. Osim toga, kada je klizač predebeo ili pretanak, svijetli prsten prstenaste dijafragme će postati veći ili manji.
3. Halo i efekat blijeđenja U procesu snimanja faznog kontrastnog mikroskopa, kada određena struktura postane tamna zbog kašnjenja faze, to nije gubitak svjetlosti, već rezultat preraspodjele svjetlosti na ravni slike. Tako će se svjetlost koja se naizgled gubi u tamnim područjima pojaviti kao svijetli oreol oko tamnijih objekata. To je nedostatak fazno-kontrastne mikroskopije, koja otežava uočavanje finih struktura, a halo fenomen je ozbiljniji kada je prstenasta dijafragma vrlo uska. Još jedan fenomen u fazno-kontrastnoj mikroskopiji je efekat senčenja, koji se odnosi na gubitak kontrasta na ivicama veće površine sa istim faznim kašnjenjem kada se posmatra faznim kontrastom.
4. Fazna inverzija Kada je n'n, kontrast svjetla i tame slike je upravo suprotan, što se naziva fazna inverzija. Neprepoznatljivo je kada je fazna razlika δ=0, a kontrast postaje veći sa povećanjem δ, a fazna inverzija će se pojaviti kada δ nastavi da raste do određene vrijednosti. Kada se koristi objektiv objektiva od 90 posto visoke vrijednosti apsorbancije (visokog kontrasta), ova vrijednost transformacije je oko 0.55λ, a kada se koristi objektiv sa 70 posto standardne vrijednosti apsorbancije, to je oko 0,33λ . Objektivi s većim vrijednostima apsorpcije trebali bi se koristiti za rješavanje manjih razlika optičkih putanja.
