Razlika između transmisione fluorescentne mikroskopije i refleksijske fluorescentne mikroskopije
1. Transmisioni fluorescentni mikroskop: Izvor ekscitacije svjetlosti se prenosi kroz materijal uzorka kroz kondenzator da pobuđuje fluorescenciju. Uobičajeni koncentratori tamnog polja, ili obični koncentratori, mogu se koristiti za podešavanje reflektora za pretvaranje pobudnog i bočnog svjetla na uzorak. Ovo je relativno staromodan fluorescentni mikroskop. Njegova prednost je jaka fluorescencija pri malom uvećanju, dok je nedostatak što fluorescencija slabi sa povećanjem povećanja. Stoga je bolje posmatrati veće materijale uzoraka.
2. Fluorescencijski mikroskop sa padajućim snopom: Ovo je novi tip fluorescentnog mikroskopa koji se razvio u moderno doba. Za razliku od prethodnog, ekscitacijsko svjetlo pada sa objektiva na površinu uzorka, koristeći isto sočivo objektiva kao i rasvjetni kondenzator i objektiv objektiva za prikupljanje fluorescencije. Dvobojni separator snopa treba dodati optičkoj putanji, koja formira ugao od 45 stepeni sa fotouranijumom. Ekscitacijsko svjetlo se reflektira u sočivo objektiva i skuplja se na uzorku. Fluorescencija koju generiše uzorak i ekscitaciono svetlo koje se reflektuje od površine sočiva objektiva i pokrivnog stakla istovremeno ulaze u sočivo objektiva i vraćaju se u separator snopa dvostruke boje, odvajajući ekscitaciono svetlo i fluorescenciju. Filter za blokiranje apsorbuje preostalo pobudno svjetlo. Ako se koriste različite kombinacije ekscitacionih filtera, separatora snopa s dvije boje i filtera za blokiranje, one mogu zadovoljiti potrebe različitih fluorescentnih reakcijskih proizvoda. Prednosti ovog fluorescentnog mikroskopa su jednolično osvetljenje vidnog polja, jasna slika i jača fluorescencija sa većim uvećanjem.
Prednosti i nedostaci transmisione fluorescentne mikroskopije
Izvor svjetlosti: živina sijalica visokog pritiska ili halogena lampa.
Reflektor: Upotreba reflektora tamnog polja za razdvajanje ekscitacije i fluorescencije.
Objektivna sočiva: Može se koristiti bilo koja vrsta objektiva.
Uzorak: Tanki uzorci su pogodniji za posmatranje transmisije.
Prednosti: ① Zbog upotrebe kondenzatora tamnog polja, pobudna svjetlost ne može ući u objektiv objektiva, što olakšava formiranje tamne pozadine i postizanje dobrog kontrasta, a bilo koje objektivno sočivo može se koristiti za posmatranje. ② Kada koristite objektiv sa malim uvećanjem, on je svjetliji od reflektivnog fluorescentnog mikroskopa.
Nedostatak: Centar i visina reflektora moraju biti pravilno podešeni, inače se ne može dobiti svijetla fluorescentna slika. Zbog ograničenja žižne daljine reflektora tamnog polja, dijapozitivi od debelog stakla se ne mogu koristiti. Područje osvjetljenja vidnog polja ne smije biti preveliko, u suprotnom može uzrokovati blijedi fluorescentna boja fluorescentnog uzorka. Debeli ili neprozirni uzorci nisu prikladni.
