Metoda pripreme mikroskopskih preparata
1. Metoda razmaza
Metoda razmazivanja je metoda pripreme stakalca tako što se materijali ravnomjerno nanose na njih.
Materijali za razmazivanje uključuju jednoćelijske organizme, male alge, krv, podloge za bakterijske kulture, rastresita tkiva životinja i biljaka, testise, prašnike itd.
Prilikom razmazivanja treba obratiti pažnju na:
(1) Staklena pločica se mora očistiti.
(2) Staklena pločica treba da bude ravna.
(3) Premaz mora biti ujednačen. Kapljicu nanesite na sredinu desno od stakala i ravnomjerno je rasporedite oštricom za seciranje ili čačkalicom.
(4) Premaz treba biti tanak. Koristeći drugo staklo kao klizač, lagano gurnite s desna na lijevo duž površine stakalca sa nanesenom tekućinom (ugao između dva klizača treba da bude 30 do 45 stepeni), i nanesite ravnomjeran tanak sloj.
(5) Fiksno. Ako je potrebna fiksacija, za fiksaciju se mogu koristiti hemijski fiksativi ili metode sušenja (bakterije).
(6) Bojenje. Bakterije koriste metilensko plavo, a krv koristi Wright otopinu za bojenje. Otopina za bojenje treba pokriti cijelu površinu premaza.
(7) Isperite. Koristite upijajući papir za upijanje ili sušenje.
(8) Zapečatite foliju. Dugotrajno očuvanje pomoću kanadske folije za drvo.
2. Metoda presovanja tableta
Metoda kompresije je metoda rezanja bioloških materijala postavljanjem između stakalca i poklopca, primjenom određenog pritiska kako bi se raspršile ćelije tkiva.
Opšti proces metode presovanja tableta:
(1) Izbor materijala. Da bi se posmatrala deoba ćelija, kao materijal treba odabrati sveže ćelije tkiva sa snažnom deobom ćelija. Kao što su vrh korena, meristem vrha stabljike, ćelije koštane srži, prašnici (ćelije majke polena). Gnijezda spermatozoida (spermatociti) itd.
(2) Fiksno. Fiksacija materijala se može odrediti prema potrebama, a uzorak treba odmah komprimirati i promatrati. Nije potrebno provoditi poseban tretman fiksacije (sinhrono sa bojenjem); Ako se materijal ne pregleda odmah nakon uzorkovanja, može se fiksirati fiksativom (obično fiksatorom octene kiseline i alkohola). Nakon fiksiranja 2-24 sata (u zavisnosti od materijala), isperite sa 95% etanolom i pohranite u 70% etanolu za kasniju upotrebu.
(3) Odvajanje. Materijale koje ćelije ne mogu lako raspršiti treba tretirati rastvorom za odvajanje hidrolizom (kao što je 1N HCl ili sperma klorovodične kiseline) u trajanju od 6-20 minuta. Nakon odvajanja, treba ih isprati vodom prije bojenja.
(4) Bojenje. Postoji mnogo vrsta boja. Hromozomi se obično boje rastvorom sirćetne kiseline magenta.
(5) Pritisnite tablet. Stavite materijal na staklo, dodajte kap vode ili otopine boje, pokrijte stakalcu poklopcem i nježno pritisnite palcem.
(6) Posmatrajte. Nakon kompresije, može se promatrati pod mikroskopom.
