Princip i strukturne karakteristike fluorescentnog mikroskopa
Fluorescentna mikroskopija koristi tačku sa visokom svetlosnom efikasnošću da emituje svetlost određene talasne dužine (kao što je ultraljubičasto svetlo 3650 in ili ljubičasto plavo svetlo 4200 in) kroz sistem filtera kao ekscitaciono svetlo da pobuđuje fluorescentne supstance u uzorku da emituje fluorescenciju razne boje Nakon toga, posmatrajte kroz uvećanje objektiva i okulara. Na ovaj način, pod jakom kontrastnom pozadinom, čak i ako je fluorescencija vrlo slaba, lako se prepoznaje i ima visoku osjetljivost. Uglavnom se koristi za istraživanje strukture i funkcije ćelije i hemijskog sastava. Osnovna struktura fluorescentnog mikroskopa sastoji se od običnog optičkog mikroskopa plus neke dodatne opreme (kao što je fluorescentni izvor svjetlosti, ekscitacijski filter, dvobojni razdjelnik zraka i filter za blokiranje, itd.). Fluorescentni izvor svjetlosti—uglavnom koristite živinu lampu ultra visokog pritiska (50-200W), koja može emitovati svjetlost različitih talasnih dužina, ali svaka fluorescentna supstanca ima talasnu dužinu pobuđivanja koja proizvodi najjaču fluorescenciju, tako da filter za pobuđivanje (Općenito, postoje ultraljubičasti, ljubičasti, plavi i zeleni ekscitacioni filteri), koji dozvoljavaju samo ekscitacionoj svetlosti određene talasne dužine da prođe i ozrači uzorak, dok apsorbuje drugu svetlost. Nakon što je svaka supstanca ozračena ekscitacionim svjetlom, emituje vidljivu fluorescenciju sa većom valnom dužinom od talasne dužine zračenja za vrlo kratko vrijeme. Fluorescencija je specifična i općenito slabija od ekscitacijske svjetlosti. Da bi se uočila specifična fluorescencija, blokiranje (ili supresija) mora se dodati iza sočiva objektiva i koristiti zajedno s njim.
Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog mikroskopa
1. Metoda osvjetljenja je obično episkopska, odnosno izvor svjetlosti se projektuje na uzorak kroz sočivo objektiva;
2. Izvor svjetlosti je ultraljubičasto svjetlo, valna dužina je kraća, a rezolucija je veća od one kod običnih mikroskopa;
3. Postoje dva specijalna filtera, onaj ispred izvora svjetlosti služi za filtriranje vidljive svjetlosti, a onaj između okulara i sočiva objektiva se koristi za filtriranje ultraljubičastih zraka radi zaštite ljudskog oka.
Fluorescencijski mikroskop je također vrsta optičkog mikroskopa, glavna razlika je u tome što je talasna dužina pobuđivanja različita. Ovo određuje razliku između fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa u smislu strukture i upotrebe.
Fluorescentna mikroskopija je suštinski alat u imunofluorescentnoj citohemiji. Sastoji se od glavnih komponenti kao što su izvor svjetlosti, sistem filterskih ploča i optički sistem. To je korištenje određene talasne dužine svjetlosti da se uzorak potakne da emituje fluorescenciju i da se posmatra fluorescentna slika uzorka pojačavanjem sočiva objektiva i sistema okulara.
