Korištenje fluorescentne mikroskopije: tehnike i vještine
Tehnički parametri fluorescentnog mikroskopa 1. Širokokutni okular 2. Akromatsko sočivo objektiva 3. Konvertor sočiva objektiva sa četiri otvora 4. Epifluorescentni uređaj Plavi (B) Zeleni (G) sistem pobude 100W živina lampa 5. Koaksijalni mehanizam za grubo i fino podešavanje fokusa: podešavanje Opseg fokusa: 15 mm Vrijednost mikropokretanja mreže: 0,002 mm 6. Dvoslojni mehanički sto Opseg uzdužnog kretanja: 70 mm Opseg bočnog kretanja: 50 mm
Koristite metodu veština
(1) Stakleni tobogan
Debljina stakala treba da bude između 0.8 i 1.2mm. Predebeo tobogan će apsorbirati više svjetla s jedne strane, a s druge strane, pobudna svjetlost se ne može koncentrirati na uzorak. Stakalca moraju biti glatka, ujednačene debljine i bez očigledne autofluorescencije. Ponekad se koriste dijapozitivi od kvarcnog stakla.
(2) Poklopno staklo
Debljina pokrovnog stakla je oko 0.17 mm, glatko. Kako bi se pojačalo pobudno svjetlo, može se koristiti i interferentno pokrivno staklo, koje je posebno pokrovno staklo presvučeno s nekoliko slojeva tvari (kao što je magnezij fluorid) koje imaju različite interferentne efekte na svjetlost različitih valnih dužina, što može uzrokovati fluorescencija ide glatko. Uzbudljiva svjetlost prolazi kroz i reflektuje se, a ova reflektovana pobudna svjetlost pobuđuje uzorak.
(3) Primerak
Kriške tkiva ili drugi uzorci ne bi trebali biti previše debeli. Ako je predebeo, najveći dio ekscitacijske svjetlosti će biti utrošen u donjem dijelu uzorka, dok gornji dio koji direktno posmatra sočivo objektiva neće biti u potpunosti pobuđen. Pored toga, preklapanje ćelija ili pokrivanje nečistoća, utiču na procenu.
(4) Sredstvo za montažu
Glicerin se obično koristi kao sredstvo za montažu, koji ne smije imati autofluorescenciju, bezbojan je i providan, a svjetlina fluorescencije je svjetlija na pH 8.5-9.5 i nije lako brzo izblijediti. Stoga se kao sredstvo za montažu obično koristi jednaka mješavina glicerola i 0.5mol/l otopine karbonatnog pufera sa pH od 9.0 do 9.5.
(5) ulje za ogledalo
Općenito, kada se uzorci promatraju fluorescentnim mikroskopima tamnog polja i uljnim sočivima, mora se koristiti ulje za uranjanje. Najbolje je koristiti specijalno nefluorescentno ulje za uranjanje. Umjesto toga se može koristiti i gornji glicerin, a može se koristiti i tekući parafin, ali je indeks prelamanja nizak, što ima blagi utjecaj na kvalitetu slike. Uticaj.
