Koji su zahtjevi za uzorke za svjetlosnu mikroskopiju?
U procesu pripreme uzorka optičkim mikroskopom, debljina kriške uzorka je između 2 i 25 um; debljina kriške elektronskog mikroskopa je unutar 50-100nm (osim visokonaponskog elektronskog mikroskopa, debljina uzorka može doseći 1um), tako da korištena metoda rezanja nije ista.
Što se tiče nosača, nosač sekcije optičkog mikroskopa je predmetno staklo, a nosač sekcije elektronskog mikroskopa je mreža nosača.
U smislu fiksacije, dijelovi optičkog mikroskopa se fiksiraju složenim fiksatorom, dok se dijelovi elektronskog mikroskopa više puta fiksiraju jednim fiksatorom
Što se tiče bojenja, bojenje optičkih uzoraka je relativno jednostavno. Prema različitim uzorcima posmatranja i tipu optičkog mikroskopa, obično je dovoljno koristiti neke fiksne mrlje. Postoje mnoge metode za ponovno bojenje uzoraka elektronskim mikroskopom, a takođe su i vrlo komplicirane, kao što je negativno bojenje, bojenje srebrom i tako dalje.
U smislu ugradnje, parafin, kolodijum, želatin, itd. se koriste kao sredstva za ugradnju rezova optičkog mikroskopa; epoksidna smola, polistirenska smola, izobutilenska smola i smola rastvorljiva u vodi koriste se kao sredstva za ugradnju preseka elektronskog mikroskopa.
Da bi vidno polje mikroskopa dobilo ujednačeno i dovoljno osvetljenje, potrebno je podesiti sistem optičkih putanja osvetljenja kada se mikroskop prvi put instalira i otklanja greške. zahtjevi. Osim toga, pravilno shvaćanje podešavanja optičkog sistema putanje osvjetljenja je neophodan korak nakon zamjene sijalice u procesu korištenja mikroskopa, a također je neophodno sredstvo za testiranje performansi mikroskopa s vremena na vrijeme u svakodnevni proces upotrebe. Podešavanje optičkog sistema osvetljenja mikroskopa uglavnom uključuje sledeće 4 stavke: 1. Preliminarno podešavanje komore lampe izvora osvetljenja van mikroskopa ① Prvo otvorite kućište komore lampe i stavite halogenu sijalicu u grlo pritiskom na opružna kopča. Prljavština poput otisaka prstiju na sijalici utječe na vijek trajanja sijalice. ②Postavite prostoriju za lampu na sto, nakon što uključite napajanje, pomoću specijalnog odvijača podesite otvor na dugmetu za fokusiranje lampe (označen sa "←→"), tako da se nit projektuje na zid 1-2 m, a slika filamenta je podešena. Zatim podesite visinu lampe kako biste podesili otvor sa žarnom niti (označen sa "──") kako bi položaj žarulja bio odgovarajući; zatim podesite otvore za zavrtnje za podešavanje levog i desnog položaja lampe (označeno sa "──") da bi levi i desni položaj žarulja bio odgovarajući.
2. Svrha pregleda i korekcije položaja iluminatora izvora svjetlosti (filamenta) u mikroskopu je da se kraj slike iluminatora podesi u vidno polje sočiva objektiva i da se osigura da vidno polje mikroskopa je u potpunosti i ujednačeno primljeno iz perspektive izvora svjetlosti. Osvetljenje, što je preduslov za podešavanje Kühler sistema osvetljenja. Potreban osnovni alat: Teleskopi za centriranje su opremljeni mikroskopom. ① Odspojite kućište od matiranog stakla u kućištu lampe i vratite kućište lampe na mikroskop ② Odaberite objektiv od 10×, uključite program izvora svjetlosti da pronađete uzorak i jasno podesite fokus, a zatim koristite objektiv od 40× sočivo za jasno fokusiranje uzorka (40× objektiv objektiva Čitava slika filamenta se može jasno vidjeti); ③ Maksimalno otvorite i dijafragmu otvora i membranu polja kondenzatora; ④ Isključite jedan od okulara, zamijenite ga teleskopom za centriranje, zgrabite bijeli dio, a drugom rukom produžite crni okular. Slika filamenta se može vidjeti u vidnom polju; ⑤Ako položaj filamenta nije prikladan, podesite otvor "──", podesite sliku filamenta u horizontalnom smjeru, podesite otvor "──" i podesite sliku filamenta u vertikalnom smjeru dok ne podesite sliku filamenta na kružnu slika koja samo ispunjava otvor objektiva; ⑥ Nakon podešavanja, vratite navlaku od matiranog stakla u prvobitni položaj, isključite teleskop za centriranje i zamenite okular za sledeće podešavanje. Gore pomenuto podešavanje osvetljenja prostorije lampe izvora svetlosti izvan mikroskopa i kalibracija položaja osvetljivača izvora svetlosti unutar mikroskopa treba da se izvrši samo kada je mikroskop instaliran i otklonjen po prvi put i kada je sijalica zamijenjen. U slučaju zabune, možete ga vratiti u prvobitno stanje prema gornjim koracima.
3. Ispravno podešavanje sistema Kohler iluminacije (Kohler) Ispravno podešavanje mikroskopa, jedan od glavnih zadataka je podešavanje sistema putanje osvetljenja, a ključno je podešavanje Kohler sistema osvetljenja. Svi koji koriste mikroskope, posebno oni koji snimaju mikroskop, trebaju imati određeno razumijevanje i vladanje principima Kühlerovog sistema osvjetljenja i njegovih koraka podešavanja, kako bi mogli u potpunosti igrati funkcije mikroskopa. Rezultirajuće fotografije mogu biti dosljednije i savršenije. Princip Kühlerovog sistema osvjetljenja je jednostavan: svjetlost koju emituje bilo koja tačka na iluminatoru izvora svjetlosti može osvijetliti vidno polje mikroskopa, a svjetlost koju emituje svaka tačka na iluminatoru izvora svjetlosti se prikuplja i nalazi se u vidno polje mikroskopa. Postiže se veoma dovoljno i ujednačeno osvetljenje. Svrha podešavanja Kuhlerovog sistema osvetljenja je da se dobije ujednačeno i dovoljno osvetljenje za posmatrano vidno polje, i da se spreči da lutajuća svetlost utiče ili ometa sistem za snimanje, kako bi se izbeglo stvaranje magle na negativu tokom fotografisanja. Osnovne komponente Kühler sistema osvetljenja sa visokim podešavanjem: dijafragma polja, sistem kondenzatora sa podešavanjem po osi. ① Odaberite 10× objektiv objektiva i 10× okular ② Stavite prednje sočivo kondenzatora u optički put, podesite dijafragmu blende na umjerenu poziciju (ne preveliku ili ne premalu), zatim podignite kondenzator u gornju poziciju, i podesite okretnu ploču kondenzatora na poziciju Bright field "J" ③ Podesite dijafragmu polja na minimum (0,1)
④ Stavite zatvoreni biološki uzorak na binu, uključite izvor svjetlosti i jasno fokusirajte
⑤ U vidnom polju će se pojaviti lokalno osvijetljeno područje ili svijetla tačka, što je zamućena slika dijafragme polja, na kojoj se jasno mogu vidjeti detalji uzorka; Jasno pogledajte detalje uzorka
⑥ Blago spustite kondenzator, tako da se svetla tačka u vidnom polju postepeno sužava i postepeno postaje jasna poligonalna slika, što je jasna slika dijafragme polja;
⑦ U normalnim okolnostima, poligonalna slika nije u centru vidnog polja. Potrebno je podesiti par vijaka za centriranje kondenzatora kako bi se poligonalna slika vidnog polja podesila na središnji položaj;
⑧ Postepeno otvarajte dijafragmu vidnog polja kako bi poligonalna slika postala upisani poligon vidnog polja i dalje provjerite stanje poravnanja. Ako poravnanje nije idealno, nastavite lagano podešavati vijak za poravnanje;
⑨ Lagano otvorite dijafragmu polja kako bi poligonalna slika nestala na rubu vidnog polja. U ovom trenutku, podešavanje Kühler sistema rasvjete je završeno. Nakon podešavanja Kühlerovog sistema osvjetljenja, cijelo vidno polje je ravnomjerno osvijetljeno, a mikrosnimci su bili svijetli i jasni sa normalnim kontrastom.
