Koja je razlika između fluorescentne i laserske konfokalne mikroskopije?
fluorescentni mikroskop
1. Fluorescentni mikroskop je uređaj koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti za osvjetljavanje predmeta koji se testira, uzrokujući da emituje fluorescenciju, a zatim promatra oblik i položaj objekta pod mikroskopom. Fluorescentna mikroskopija se koristi za proučavanje apsorpcije, transporta, distribucije i lokalizacije supstanci unutar ćelija. Neke supstance u ćelijama, kao što je hlorofil, mogu emitovati fluorescenciju nakon što su izložene ultraljubičastom zračenju; Neke supstance same po sebi možda ne emituju fluorescenciju, ali ako su obojene fluorescentnim bojama ili fluorescentnim antitelima, one takođe mogu emitovati fluorescenciju pod ultraljubičastim zračenjem. Fluorescentna mikroskopija je jedan od alata za kvalitativna i kvantitativna istraživanja ovih supstanci.
2. Princip fluorescentnog mikroskopa:
(A) Izvor svjetlosti: Izvor svjetlosti emituje svjetlost različitih talasnih dužina (od ultraljubičastog do infracrvenog).
(B) Izvor svjetlosti ekscitacionog filtera: emituje svjetlost određene talasne dužine koja može proizvesti fluorescenciju u uzorku, dok blokira svjetlost koja je beskorisna za ekscitaciju fluorescencije.
(C) Fluorescentni uzorci: uglavnom obojeni fluorescentnim pigmentima.
(D) Filter za blokiranje: selektivno prenosi fluorescenciju blokiranjem ekscitacijske svjetlosti koju uzorak nije apsorbirao, a neke valne dužine se također selektivno prenose u fluorescenciji. Mikroskop koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti za emitiranje fluorescencije iz ozračenog objekta. Elektronski mikroskop su prvi sastavili Knorr i Harroska u Berlinu, Njemačka, 1931. godine. Ovaj tip mikroskopa koristi brzi elektronski snop umjesto snopa svjetlosti. Zbog mnogo kraće talasne dužine protoka elektrona u poređenju sa svetlosnim talasima, uvećanje elektronskog mikroskopa može da dostigne 800000 puta, uz minimalnu granicu rezolucije od 0,2 nanometra. Skenirajući elektronski mikroskop, koji je počeo da se koristi 1963. godine, omogućava ljudima da vide sićušne strukture na površini objekata.
3. Opseg primjene: Koristi se za povećanje slika malih objekata. Obično se koristi za posmatranje biologije, medicine, mikroskopskih čestica, itd.
konfokalni mikroskop
1. Konfokalni mikroskop dodaje polureflektivno sočivo na putanju reflektirane svjetlosti, koje savija reflektiranu svjetlost koja je već prošla kroz sočivo u drugim smjerovima. U fokusnoj tački nalazi se pregrada sa rupom, a mala rupa se nalazi na žarištu. Iza pregrade se nalazi fotoumnožačka cijev. Može se zamisliti da reflektovana svjetlost prije i nakon žarišne tačke detekcije ne može biti fokusirana na malu rupu kroz ovaj konfokalni sistem i da će biti blokirana pregradom. Dakle, fotometar mjeri intenzitet reflektirane svjetlosti u žarištu.
2. Princip: Tradicionalni optički mikroskopi koriste izvore svjetlosti na polju, a slika svake tačke na uzorku će biti pod utjecajem difrakcije ili raspršene svjetlosti iz susjednih tačaka; Laserski skenirajući konfokalni mikroskop koristi laserski snop za formiranje tačkastog izvora svjetlosti kroz osvijetljeni otvor za skeniranje svake tačke u fokalnoj ravni uzorka. Osvetljena tačka na uzorku se snima na otvoru za detekciju i prima se tačku po tačku ili liniju pomoću fotomultiplikatorske cevi (PMT) ili uređaja za termoelektričnu spregu (cCCD) nakon rupice za detekciju, brzo formirajući fluorescentnu sliku na monitoru računara. ekran. Rupa za osvjetljenje i rupica za detekciju su konjugirani u odnosu na žižnu ravan sočiva objektiva. Tačke na fokalnoj ravni su istovremeno fokusirane na otvor za osvjetljenje i emisioni otvor, a tačke izvan žarišne ravni neće biti snimljene na rupici za detekciju. Ovo rezultira konfokalnom slikom koja predstavlja optički poprečni presjek uzorka, prevazilazeći nedostatak zamućenih slika u konvencionalnoj mikroskopiji.
3. Područja primjene: uključujući medicinu, istraživanje životinja i biljaka, biohemiju, bakteriologiju, ćelijsku biologiju, nauku o tkivima i embrionima, nauku o hrani, genetiku, farmakologiju, fiziologiju, optiku, patologiju, botaniku, neuronauku, biologiju mora, nauku o materijalima, elektronsku nauku, mehanika, geologija nafte i mineralogija.
