Koji se mikroskop koristi da se vidi oblik mikrobnih ćelija
Skupni naziv za sve sićušne organizme koje je pojedincima teško promatrati golim okom. Mikroorganizmi uključuju bakterije, viruse, gljivice i nekoliko algi. (Međutim, neki mikroorganizmi su vidljivi golim okom, kao što su gljive koje pripadaju gljivama, Ganoderma lucidum, itd.) Virusi su vrsta "nećelijskih organizama" sastavljenih od nekoliko komponenti kao što su nukleinske kiseline i proteini, ali njihova opstanak mora zavisiti od živih ćelija. Prema različitim okruženjima koja postoje, mogu se podijeliti na prokariotske mikroorganizme, svemirske mikroorganizme, gljivične mikroorganizme, mikroorganizme kvasca, morske mikroorganizme itd.
Uloga i šteta mikroorganizama:
Jedan od najvažnijih uticaja mikroorganizama na ljude je prevalencija zaraznih bolesti. 50 posto ljudskih bolesti uzrokovano je virusima. Istorija mikroba koji izazivaju ljudske bolesti je istorija stalne borbe ljudskih bića s njima. Ljudska bića su postigla veliki napredak u prevenciji i liječenju bolesti, ali se i dalje pojavljuju nove mikrobne infekcije koje se ponovo pojavljuju, kao što je veliki broj virusnih bolesti kojima nedostaju učinkoviti terapijski lijekovi. Patogeni mehanizam nekih bolesti nije jasan. Zloupotreba velikog broja antibiotika širokog spektra izazvala je snažan selekcijski pritisak, uzrokujući mutaciju mnogih sojeva, što dovodi do pojave rezistencije na lijekove, a ljudsko zdravlje je ugroženo novim prijetnjama. Neki segmentirani virusi mogu mutirati rekombinacijom ili reasortacijom. Najtipičniji primjer je virus gripe.
Nakon poznavanja specifične definicije mikroorganizama, koju vrstu mikroskopa bi eksperimentator trebao koristiti kada proučava mikroorganizme da bi vidio, i koji mikroskop se može koristiti da se bolje vidi, te da se promatraju i analiziraju uobičajeni mikrobni oblici.
Izum mikroskopa je da se mogu vidjeti nasmejani objekti koji se ne mogu videti golim okom. Veličina mikroorganizama je vrlo mala, pa ih je potrebno povećati i posmatrati uz pomoć mikroskopa. Osim toga, postoji mnogo vrsta mikroorganizama, tako da u osnovi većina optičkih mikroskopa može Za promatranje mikroorganizama, sljedeće pitanje je koji tip mikroskopa treba koristiti za posmatranje i analizu mikroorganizama. Uobičajeni mikroskopi za posmatranje mikrobne morfologije uključuju biološke mikroskope, fazno kontrastne mikroskope, invertne mikroskope, fluorescentne mikroskope i konfokalne mikroskope. Mikroskop i tako dalje.
U nastavku su opisani različiti mikroskopi koji se koriste za posmatranje mikroorganizama:
1. Običan svjetlosni mikroskop
Prirodno svjetlo ili svjetlost se koristi kao izvor svjetlosti, a njegova talasna dužina je oko {{0}}.4 μm. Rezolucija mikroskopa je polovina talasne dužine, odnosno 0.2 μm, a najmanja slika vidljiva golim okom je 0.2 mm. Stoga, korištenje uljnog (imerzionog) ogledala za uvećanje 1000 puta može povećati čestice od 0,2 μm na 0,2 mm vidljive golim okom. Obični optički mikroskopi mogu se koristiti za promatranje bakterija, aktinomiceta i gljivica.
2. Mikroskopija tamnog polja se obično koristi za posmatranje neobaljene mikrobne morfologije i kretanja. Nakon što se kondenzator tamnog polja ugradi u običan mikroskop, svjetlost ne može prodrijeti direktno iz sredine, a vidno polje je tamno. Kada uzorak primi koso svjetlo s ruba kondenzatora, može se raspršiti, tako da se u pozadini tamnog polja mogu uočiti svijetli mikroorganizmi kao što su bakterije ili spirohete.
3. Fazni kontrastni mikroskop Fazni kontrastni mikroskop koristi svjetlosni efekat ploče s faznom razlikom da promijeni svjetlosnu fazu i amplitudu direktne svjetlosti i pretvori razliku svjetlosne faze u razliku intenziteta svjetlosti. Pod fazno-kontrastnim mikroskopom, kada svjetlost prolazi kroz neobojen uzorak, razlika u svjetlosnoj fazi je uzrokovana nedosljednošću gustine različitih dijelova uzorka, a može se uočiti morfologija, unutrašnja struktura i način kretanja mikroorganizama.
4. Fluorescencijski mikroskop Fluorescencijski mikroskop je u osnovi isti kao i obični optički mikroskop, glavna razlika je izvor svjetlosti, filter i kondenzator. Trenutno većina njih koristi epi-svjetlosne uređaje, a kao izvori svjetlosti najčešće se koriste živine lampe visokog pritiska, koje mogu emitovati ultraljubičasto ili plavo-ljubičasto svjetlo. Postoje dvije vrste filtera: filter pobude i filter apsorpcije. Osim općih kondenzatora svijetlog polja, kondenzatori tamnog polja se također mogu koristiti u fluorescentnim mikroskopima koji koriste plavo svjetlo kako bi se poboljšao kontrast između fluorescencije i pozadine. Ova metoda je primjenjiva na detekciju ili identifikaciju bakterija obojenih fluorescentnim pigmentima ili u kombinaciji s fluorescentnim antitijelima.
5. Elektronski mikroskopi koriste protok elektrona kao izvor svjetlosti. U poređenju sa vidljivom svetlošću, talasna dužina je desetine hiljada puta drugačija, što značajno poboljšava rezoluciju. Magnetni kalem se koristi kao sistem optičkog pojačanja, a uvećanje može doseći desetine hiljada ili stotine hiljada puta. Često se koristi u virusnim česticama. i promatranje ultrastrukture bakterija.
Posmatranje neobojenih mikrobnih uzoraka:
Neobojeni uzorci se općenito mogu koristiti za promatranje morfologije, snage i kretanja bakterija. Bakterije su bezbojne i prozirne kada nisu obojene, a posmatraju se pod mikroskopom uglavnom po razlici između indeksa prelamanja bakterije i okolnog okruženja. Bakterije sa flagelama se kreću snažno, dok bakterije bez flagela pokazuju nepravilno Brownovo kretanje. Vibilne bakterije kao što su Treponema pallidum, Leptospira i Campylobacter imaju karakteristične oblike i obrasce kretanja, koji su od dijagnostičkog značaja. Najčešće korištene metode su metoda pada tlaka, metoda visećeg pada i kapilarna metoda.
1. Metoda viseće kapi Nanesite vazelin oko konkavne rupe na čistom konkavnom staklenom predmetu, uzmite prsten bakterijske suspenzije sa petljom za inokulaciju i stavite ga u središte pokrivnog stakla, a zatim poravnajte konkavnu rupu na konkavnom staklenom predmetu sa kapljicu u sredini pokrovnog stakla i Stavite poklopac, a zatim ga brzo okrenite, lagano pritisnite pokrovno staklo kako bi se čvrsto zalijepilo za vazelin na rubu konkavne rupe, a zatim promatrajte ispod jakog mikroskop (ili tamno polje).
2. Uzmite prsten bakterijske suspenzije sa inokulacionom petljom i stavite ga u centar čistog staklenog stakala metodom pada pritiska, a suspenziju bakterija nježno pokrijte pokrovnim staklom, vodeći računa da izbjegnete stvaranje mjehurića zraka i spriječite bakterijska suspenzija od prelijevanja. Posmatranje svijetlog polja (ili tamnog polja) pod sočivom velike snage.
3. Kapilarna metoda se uglavnom koristi za ispitivanje kinetike anaerobnih bakterija. Obično odaberite dužinu od 60~70mm. Nakon sifoniranja suspenzije anaerobnih bakterija kroz kapilaru sa otvorom od 0.5-1.0 mm, zatvorite dva kraja kapilare plamenom. Kapilara je fiksirana na staklo plastičnim papirom i posmatrana pod sočivom velike snage u tamnom polju.
Posmatranje obojenih mikrobnih uzoraka mikroskopom:
Nakon bojenja bakterijskog uzorka, zbog oštrog kontrasta u boji između bakterije i okolnog okruženja, mogu se utvrditi morfološke karakteristike bakterija (kao što su veličina, oblik, raspored itd.) bakterija i neke posebne strukture. jasno promatrane pod običnim optičkim mikroskopom (kao što su kapsule, flagele, spore, itd.), a bakterije se mogu klasificirati i identificirati prema reaktivnosti bojenja.
(1) Opći postupak bakterijskog bojenja Opći postupak bakterijskog bojenja je: razmazivanje (sušenje)—fiksacija—bojenje.
1. Razmaz Priprema krvi, sekreta, izlučevina, punkcijske tekućine i tečne kulture, te direktni razmazi tankog filma na stakalcima; obdukcije ili inficiranih životinjskih tkiva, namažite leziju pamučnim štapićem za uzorkovanje. Za pripremu kolonija bakterija ili travnjaka na čvrstoj podlozi, prvo upotrijebite petlju za inokulaciju da uzmete prsten normalnog fiziološkog rastvora i stavite ga u središte stakalca, a zatim koristite sterilnu inokulacijsku petlju da uzmete malu količinu kulture i sameljete je ravnomjerno u fiziološkom rastvoru i rasporedite ga na 1 cm2 Velike ili male obojene površine, ostavite da se prirodno osuši na sobnoj temperaturi ili da se osuši polako na daljinu.
2. Svrha fiksacije je ubijanje bakterija, koagulacija bakterijskog proteina i strukture i olakšavanje bojenja; podstiču bakterije da prianjaju na stakalcu kako bi se izbjeglo ispiranje vodom tokom pranja; mijenjaju propusnost bakterija za boje, što je korisno za strukturu bakterijskih stanica bojenja. Obično se fiksira zagrijavanjem plamenom, a osušeni razmaz se brzo 3 puta propušta kroz plamen. Bolje je da ne opečete kožu na stražnjoj strani šake kada dodirne tobogan.
3. Bojenje Prema različitim svrhama inspekcije, odaberite različite metode bojenja za bojenje. Prilikom bojenja dodajte otopinu boje kap po kap kako biste povećali pokrivenost.
4. Bojica Svaka supstanca koja može povećati afinitet između boje i obojenog predmeta, fiksirati boju na obojeni predmet i uzrokovati promjenu propusnosti ćelijske membrane naziva se jedka. Obično se koriste stipsa, taninska kiselina, soli metala i jod, itd., a zagrijavanje se također koristi za promoviranje bojenja. Bojalice se mogu koristiti između primarnog bojenja i kontraboja, a mogu se koristiti i nakon fiksiranja ili sadržane u fiksativu i bojenju.
5. Dekolorizacija Bilo koji hemijski agens koji može ukloniti boju obojenog predmeta naziva se dekolorizator. Etanol, aceton, itd. se obično koriste kao dekolorizatori. Sredstvo za dekolorizaciju može otkriti stupanj stabilnosti kombinacije bakterija i boja, koje se mogu koristiti za diferencijalno bojenje.
6. Protivbojno bojenje Bakterije ili njihove strukture koje su obezbojene često se protivboje rastvorom protiv bojenja radi lakšeg posmatranja. Boja otopine za protivbojanje se razlikuje od boje otopine primarne boje kako bi se stvorio oštar kontrast. Protivbojenje ne bi trebalo da bude prejako, kako ne bi prikrilo boju početnog bojenja.
