Princip rada laserskog konfokalnog mikroskopa
Princip rada laserskog konfokalnog mikroskopa
Olympus laserski konfokalni mikroskop je detektor koji može hvatati signale. Njegov princip rada je da će se tačkasti izvor svjetlosti prikazati kao uvećana tačka nazvana "Airy disk" nakon prolaska kroz fluorescentni mikroskop. U standardnom interferometrijskom konfokalnom mikroskopu bijelog svjetla, svjetlost koja se emituje izvan fokalne ravni blokira rupica čija veličina određuje koliki dio Airy diska može ući u detektor. Što je rupica manja, rezultujuća slika je oštrija, a slika je zatamnjenija jer se gubi većina svjetla. Što je otvor blende manji, to je bolja rezolucija, ali – opet – gubi se više svjetlosnog signala. Olympus laserski konfokalni mikroskop može istovremeno pružiti CCD sliku u boji i konfokalnu sliku laserskog skeniranja. Olympus konfokalni laserski mikroskopi su sposobni za mjerenje visine kroz konfokalnu postavku jednog izvora svjetlosti, jednog uzorka i jednog detektora. Kada se uzorak nalazi u fokalnoj ravni objektivnog sočiva i lasersko svjetlo reflektirano od površine uzorka fokusira se u konfokalni otvor, fotodetektor će primiti signal od uzorka. Kada je uzorak u položaju van fokusa, konfokalni otvor ne prima laserski signal, tako da se prikuplja samo signal u fokusu. Ova karakteristika može da realizuje funkciju optičkog preseka Olympus laserskog konfokalnog mikroskopa.
Prednosti konfokalne laserske mikroskopije
1. Koristeći lasersko svjetlo kao izvor svjetlosti, nakon što su odgovarajuće fluorescentne sonde označene, uzorak se skenira tačku po tačku kako bi se dobile dvodimenzionalne slike optičkog poprečnog presjeka sloj po sloj. Ima funkciju "CT ćelije" i može biti podržan kompjuterskim softverom za trodimenzionalnu rekonstrukciju za dobijanje trodimenzionalnih slika, koje se mogu rotirati pod bilo kojim uglom da bi se posmatrao trodimenzionalni oblik i prostorni odnos ćelija i tkiva;
2. Može posmatrati žive ćelije i tkiva bez oštećenja i dinamički meriti fiziološke informacije živih ćelija kao što su koncentracija Ca jona i pH vrednost u ćelijama;
3. Može mjeriti fluidnost ćelijske membrane, međućelijsku komunikaciju, ćelijsku fuziju, elastičnost citoskeleta, itd., i može se koristiti kao "svjetlosni nož" za dovršetak unutarćelijske "operacije". Ova tehnologija omogućava in situ dinamičko i kvantitativno posmatranje i merenje živih ćelija i tkiva.
