Prednosti i ograničenja višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije
1. Pobuđen crvenom ili infracrvenom svjetlošću, raspršivanje svjetlosti je malo (rasipanje malih čestica je obrnuto proporcionalno četvrtom stepenu talasne dužine).
2. Nema potrebe za rupicama, u stanju da prikupi više raspršenih fotona iz poprečnog presjeka slike.
3. Rupe ne mogu razlikovati raspršene fotone emitovane iz defokusiranih ili fokalnih područja, a višefotoni imaju bolji omjer signal-šum u dubokoj slici.
4. Ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za jednofotonsko pobuđivanje lako se apsorbira i prigušuje od strane uzorka prije nego snop stigne do žarišne ravni, što otežava pobuđivanje dubokih slojeva.
5. U smislu biološkog mikroskopskog posmatranja, prvo treba uzeti u obzir da se ne ošteti aktivno stanje samog organizma i da se održi cirkulacija vode, koncentracije jona, kiseonika i hranljivih materija. U polju posmatranja svjetlosti, i toplinska i fotonska energija moraju ostati unutar doze zračenja i svjetlosne energije koje ne oštećuju ćelije.
6. Multifotonska mikroskopija također ima mnoge prednosti. U smislu trodimenzionalne rezolucije, invazije dubine, efikasnosti raspršenja, pozadinskog svjetla, odnosa signal-šum, kontrole, itd., laserski mikroskopi imaju neusporedive ili superiorne karakteristike koje prethodni laserski mikroskopi nisu posjedovali.
Višefotonski konfokalni laserski skenirajući mikroskop proširen je na različita polja istraživanja i primjene. Može izvoditi trodimenzionalno nedestruktivno posmatranje uzoraka u njihovom prirodnom stanju i poboljšati rezoluciju i omjer signal-šum sistema Koristeći promjene u svojstvima materijala nakon višefotonske ekscitacije, trodimenzionalna visina, skladištenje podataka u bilo kojem smjeru i trodimenzionalna vrijednost, također može biti pohranjena u bilo kojem smjeru. Može se vjerovati da će daljnjim razvojem mehaničkih, materijalnih i laserskih tehnologija vezanih za multifotonsku konfokalnu mikroskopiju, multifotonska konfokalna laserska skenirajuća mikroskopija imati veći razvoj i širu primjenu.
Nedostaci su sljedeći:
1. Samo za fluorescentno snimanje.
2. Ako uzorak sadrži hromofore koji mogu apsorbirati ekscitacijsko svjetlo, kao što su pigmenti, uzorak može biti podvrgnut termičkom oštećenju.
3. Rezolucija je malo smanjena, iako se može poboljšati istovremenom upotrebom konfokalnih malih rupa, doći će do gubitka signala.
4. Zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
