Biomikroskopija s obzirom na volumen blokova tkiva
Biološka mikroskopija Do sada, hladna fiksacija, zamrznuti ultratanki rez i sušenje zamrzavanjem su rutinske metode za mikrorezove tkiva i ćelija rendgenskim zrakama. Detalji ove metode su objašnjeni kako slijedi:
Za biološke mikroskope sa kondenzatorom, kondenzator se može pomerati gore-dole kako bi osvetljenost bila umerena, a otvor promenljivog svetla se takođe može promeniti da bi se postigla umerena osvetljenost od 9b. Ako je svjetlo sunčano, kondenzator se može podići na odgovarajući način, a otvor promjenjivog izvora svjetlosti može se na odgovarajući način povećati. Ako je svjetlo prejako, kondenzatorsko sočivo se može na odgovarajući način spustiti, a otvor svjetla koji se ukršta može na odgovarajući način smanjiti. Ako se i dalje osjećate blistavo u ovom slučaju, možete odabrati odgovarajući filter i postaviti ga na držač ispod kondenzatora. Ovaj hrast će moći da dobije sjaj koji vas zadovoljava. Naravno, podešavanje gornjeg i donjeg položaja kondenzatora, podešavanje veličine otvora promjenjivog optičkog očitavanja i odabir odgovarajućeg filtera zahtijeva određeni period prakse za stjecanje iskustva.
Vrlo važno pitanje u biološkoj mikroskopiji je da se u procesu uzorkovanja i odvajanja ćelija, nakon sušenja zamrzavanjem i ugradnje smole (FD), nakon zamrzavanja ultra tankih agregata, i nakon sušenja zamrzavanjem, sadržaj 65 elemenata u svakom dijelu mora pažljivo rukovati. Ćelije koje se analiziraju ne mogu se oštetiti. Jer rendgenska mikroanaliza ne samo da uključuje mnogo koraka, već i mnogo košta. Ako su analizirane ćelije oštećene ćelije ili mrtve ćelije nakon dužeg vremena i višestepene obrade, veoma je žalosno donositi pogrešne zaključke. Na primjer, kardiomiociti razdvojeni tretmanom kolagenazom imaju dva oblika, jedan je u obliku dugačke šipke, a drugi je okrugao. Potonje su umiruće ćelije koje su oštećene tokom izolacije ćelija.
Biomikroskopija Količina i distribucija elektrolita u ova dva tipa ćelija su prilično različite. Na je vrlo visok, a K vrlo nizak u kružnim kardiomiocitima, a koncentracija ca u nematodama je vrlo visoka. Nakon provjere drugim metodama analize, dokazano je da su visoki Na i nizak K okruglih stanica i visoki Ca u mitohondrijima posljedica oštećenja ćelijske membrane tokom procesa odvajanja ćelija. Metoda ledeno hladne fiksacije ćelija i tkiva obično je da se prvo usvoji gašenje i fiksacija, a zatim pohranjuju u tekućem dušiku. Gašenje fiksacije je veoma važno za efekat konzervacije. Žive ćelije ili svježa tkiva su bogata vodom. Prilikom gašenja, dijelovi ćelija ili tkiva koji su u direktnom kontaktu sa zgnječenim rashladnim sredstvom (posebno pri gašenju tečnim dušikom) često se prvi zamrznu i fiksiraju, formirajući tako „ljusku“, koja otežava Centralni dijelovi ćelija smrvljena i hladno fiksirana. Stoga, kada se radi analiza mikro-područja X-line, često se otkrije da se u centru većih ćelija nalaze kristali leda. Kako bi se to spriječilo, kao pokvareno rashladno sredstvo koristi se supstanca s tačkom topljenja višom od one u tekućem dušiku, ali nižom od one 806c. Takvih supstanci ima mnogo, ali najjeftiniji je koncentrirani propan (tačka ključanja - 42.120c, tačka topljenja - 187.10c, molekulska težina 44.1), a brzina hlađenja je najveća. Ali njegov nedostatak je što je zapaljiv.
Biološki mikroskop može staviti mišićno vlakno na poseban nosač, tako da kada kontrakcija mišićnog vlakna dostigne određenu fazu i treba je fiksirati, odmah pokrenuti mlaznicu da prska tekući propan na mišićno vlakno kako bi ga ugasio i popravio. Zatim su mišićna vlakna zajedno sa okvirom izvađena i stavljena u tečni azot. Ako fiksirate krvne ćelije ili izolovane ćelije, prvo koncentrirate ćelije centrifugiranjem pri maloj brzini, prebacite ćelije u srebrnu bočicu sa dobrom toplotnom provodljivošću, stavite bočicu u tečni propan i zamrznite za fiksaciju. Prilikom fiksiranja pankreasa štakora u laboratoriju Hall, dva čelična bloka su prethodno ohlađena tekućim helijumom (ili tekućim dušikom), a dva bakrena bloka stegnuta su pincetom i postavljena na prednji i stražnji dio pankreasa kako bi se ugasili i učvrstili. pankreas. Tkiva ili ćelije mogu se čuvati u tekućem dušiku za dugotrajno skladištenje nakon gašenja i fiksiranja.
Biološka mikroskopija Pored najcjenjenije metode zamrznutih ultratankih rezova, evo još jedne tehnike taloženja koju koriste naučnici. Supstanca se dodaje kako bi se formirao sediment sa komponentom koja se analizira kako bi se imobilizirala prije analize, a sediment se zatim analizira. Na primjer, ljudi često koriste oksalat i piroantimonat za taloženje ca u mišićnim stanicama. Prvi nije dovoljno osjetljiv na nisku koncentraciju Ca u citoplazmi; piroantimonat je osjetljiviji i može formirati elektronske naslage sa slobodnim Ca u mozgu, ali piroantimonat nije kompatibilan sa natrijumom, manganom, barijumom, gvožđem. Naslage se takođe formiraju i manje su specifične. Proces pripreme uzorka je sličan pripremi uzoraka ultratankih presjeka običnih transmisionih elektronskih mikroskopa, razlika je u tome što je 3 posto kalijum piroantimonata (fosfatni pufer fiziološki rastvor pH 7,6) fiksirano 6 sati prije fiksacije, a na obojenim ultratankim rezovima mišića, Crne naslage su viđene u srednjim linijama traka A i 2 svakog sarkomera, a neobojeni preseci su korišteni za rendgensku mikroanalizu. Diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB) je korišten za taloženje tvari koje sadrže hem i tako dalje. Kombinacija histohemijske precipitacijske reakcije i rendgenskog mosta za mikrodiferencijaciju može se razmotriti u laboratorijama koje nemaju uslove za zamrznute ultratanke rezove. Polukvantitativno se može uraditi prema visini vrha elemenata koji se analiziraju
