Detaljno opišite korake odabira i metode fluorescentnih sondi za konfokalnu mikroskopiju
U eksperimentima sa konfokalnim mikroskopima, neki eksperimentalni indikatori se mogu detektovati korišćenjem autofluorescencije samog uzorka ili egzogenih supstanci, ali većina supstanci koje se testiraju nemaju merljivu fluorescenciju i moraju biti obeležene fluorescentnim sondama. Ima mjerljiv fluorescentni signal. Dakle, kako odabrati fluorescentne sonde za konfokalnu mikroskopiju?
1. Odredite indikatore koji će se testirati u skladu sa svrhom eksperimenta
Kada se odredi indeks detekcije, određuje se i raspon izbora fluorescentnih sondi. Može se vidjeti da je izbor fluorescentne sonde koja će se koristiti u eksperimentu određen svrhom eksperimenta. Na primjer, ako je svrha eksperimenta proučavanje promjena jona kalcija u kardiomiocitima kada dođe do atrijalne fibrilacije, može se utvrditi da je supstanca koja se testira kalcijevi joni u kardiomiocitima, a raspon odabira fluorescentnih sondi je ograničen na sonde kalcijevih jona koje mogu označiti žive ćelije. Igla.
2. Odredite opseg dostupnih fluorescentnih sondi
Za nove eksperimentalne supstance ili indikatore, ako svrha eksperimenta nije istraživanje novih fluorescentnih sondi, možete odabrati primjenu zrelih sondi i metoda označavanja. Tip ili raspon fluorescentnih sondi koje mogu označiti supstancu koja se testira može se odrediti pretraživanjem mjerodavne literature ili kataloga proizvoda poznatih kompanija reagensa u zemlji i inostranstvu.
3. Ispitati da li karakteristike fluorescentne sonde ispunjavaju zahtjeve za pripremu fluorescentnih uzoraka
Karakteristike fluorescentnih sondi direktno utiču na obeležavanje uzoraka i eksperimentalne rezultate. Stoga, prije odabira fluorescentnih sondi i označavanja uzoraka u eksperimentu, potrebno je u potpunosti razumjeti njihove fluorescentne karakteristike. Karakteristike fluorescentnih sondi koje treba istražiti uključuju:
1. Karakteristike reakcije svjetlosnih sondi i uzoraka
2. Osetljivost i intenzitet fluorescencije fluorescentnih sondi
3. Spektralna svojstva uzoraka označenih fluorescentnim sondama
4. Stabilnost fluorescencije
5. Interakcija između višestruke fluorescencije u uzorku
