Određivanje mikrobne populacije - metoda direktnog mikroskopskog brojanja!
I. Zahtjevi za svrhu
1, Da razjasnimo princip brojanja hematokritnih ploča.
2, Savladajte metodu brojanja mikroba pomoću hematokritne ploče.
II. Osnovni principi
Metoda direktnog brojanja mikroskopa je mala količina suspenzije uzorka koja se testira na posebnom predmetu sa definisanom površinom i zapreminom (takođe poznatom kao bakteriološki brojač), u mikroskopu direktno brojanje jednostavnom, brzom, intuitivnom metodom. Trenutno se najčešće koriste domaći i strani bakteriološki brojači: ploča za brojanje krvnih zrnaca, Peteroff-Hauser bakteriološki brojači i Hawksley bakteriološki brojači itd., koji se mogu koristiti za kvasac, bakterije, spore plijesni i druge suspenzije brojanja, osnovni princip je isti. Posljednje dvije vrste brojača imaju ukupnu zapreminu od 0.02mm3 nakon stavljanja pokrovnog stakala, a razmak između pokrovnog stakala i noseće kriške je samo 0,02mm, pa su manje ćelije kao npr. bakterije se mogu posmatrati i brojati pomoću objektiva za uranjanje u ulje. Osim upotrebe ovih brojača, postoji i metoda procjene odnosa površine razmaza i vidnog polja posmatranog direktno pod mikroskopom, koja se uglavnom koristi za bakteriološko ispitivanje kravljeg mlijeka. Prednosti metode direktnog brojanja mikroskopom su intuitivne, brze i jednostavne za rukovanje. Međutim, nedostatak ove metode je što je rezultat obično zbir mrtvih i živih organizama. Postoje neke metode za prevazilaženje ovog nedostatka, kao što je kombinacija kulture mikrokomora obojene živim bakterijama (kratko vrijeme) i dodavanje inhibitora citokineze kako bi se postigla svrha brojanja samo živih organizama.
Koraci operacije
1, Priprema bakterijske suspenzije
Sterilnom fiziološkom otopinom napravite bakterijsku suspenziju pivskog kvasca odgovarajuće koncentracije.
2, Komora za brojanje ogledala
Prije dodavanja uzoraka, najprije treba pregledati komoru za brojanje ploče za brojanje. Ako ima prljavštine, potrebno je očistiti i osušiti fenom prije brojanja.
3, Dodavanje uzoraka
Očistite i osušite ploču za brojanje krvnih zrnaca prekrivenu pokrovnim stakalcem, a zatim sterilnom kapilarnom biretom otresite suspenziju pivskog kvasca s ruba pokrovnog stakla kako biste ispustili malu kap, tako da bakterijska tekućina duž otvora kapilarnim prodorom u komora za brojanje automatski, općenito komora za brojanje može se napuniti bakterijskom tekućinom. Prilikom uzimanja uzoraka, bakterijski rastvor prvo treba dobro promućkati; pri dodavanju uzoraka komora za brojanje ne bi trebala imati mjehuriće zraka.
4, brojanje mikroskopom
Nakon dodavanja uzorka, ostavite ga da odstoji 5 minuta, a zatim stavite ploču za brojanje krvnih zrnaca na podlogu za mikroskop, prvo pronađite lokaciju komore za brojanje sa malim povećanjem, a zatim je promijenite na veliko povećanje za brojanje. Prilagodite jačinu svjetla mikroskopa na odgovarajući način, jer mikroskop sa reflektorom također treba obratiti pažnju na to da svjetlost ne smije biti nagnuta na jednu stranu, u suprotnom vidno polje nije lako proći kroz jasnu liniju rešetke komore za brojanje, ili vidjeti samo vertikalnu liniju ili samo horizontalnu liniju. Ako se otkrije da je bakterijska tekućina pregusta ili prerijetka prije brojanja, potrebno je ponovno podesiti razrjeđenje prije brojanja. Opći zahtjevi za razrjeđivanje uzorka od oko 5 do 10 bakterija u svakoj ćeliji su odgovarajući. Za svaku komoru za brojanje biraju se organizmi u 5 srednjih odjeljaka (4 ugla i jedan srednji odjeljak u sredini) za brojanje. Organizmi koji se nalaze na linijama mreže obično se broje samo na gornjoj i desnoj liniji. U slučaju pupanja kvasca, kada tijelo pupanja dosegne polovinu veličine matične ćelije, računa se kao dva organizma. Brojanje uzorka iz dvije komore za brojanje u prosječnu vrijednost za izračunavanje sadržaja bakterija u uzorku.
5. Čišćenje hematokritne ploče
Nakon upotrebe, isperite ploču za brojanje krvnih zrnaca vodom pod slavinom, nemojte koristiti tvrde predmete za pranje i četkanje, sušite je sami ili sušite sušilom za kosu nakon pranja. Mikroskopski pregledajte ploču da vidite da li u svakom odeljku ima ostataka organizama ili drugih taloga. Ako nije čist, pranje se mora ponavljati dok ne bude čist.
