Određivanje broja mikroorganizama - mikroskopska metoda direktnog brojanja!
Fundamental
Mikroskopska metoda direktnog brojanja je jednostavna, brza i intuitivna metoda stavljanja male količine suspenzije uzorka za testiranje na posebno staklo (također poznato kao brojač bakterija) sa određenom površinom i zapreminom, i brojanjem direktno ispod mikroskop. Trenutno, najčešće korišćeni brojači bakterija u zemlji i inostranstvu uključuju: ploču za brojanje krvnih zrnaca, Peteroff-Hauserov brojač bakterija i Hawksley brojač bakterija, itd. Svi se mogu koristiti za brojanje suspenzija kao što su kvasac, bakterije i spore plijesni, i osnovni principi su isti. Posljednja dva brojača bakterija imaju ukupnu zapreminu od 0.02mm3 nakon što su prekriveni pokrovnim staklom, a razmak između pokrovnog stakla i stakala je samo 0,02 mm, tako da male ćelije kao npr. bakterije se mogu posmatrati i prebrojati pomoću objektiva sa uljnim potapanjem. Pored upotrebe ovih brojača bakterija, postoji i metoda procjene direktnog promatranja omjera površine razmaza i površine vidnog polja pod mikroskopom. Ova metoda se uglavnom koristi za bakteriološko ispitivanje mlijeka. Prednost metode direktnog brojanja mikroskopa je u tome što je intuitivan, brz i jednostavan za rukovanje. Ali nedostatak ove metode je što su mjereni rezultati obično zbroj mrtvih i živih bakterija. Trenutno postoje neke metode za prevazilaženje ovog nedostatka, kao što je kombinovanje živih bakterija bojenjem mikrokomorne kulture (kratko vrijeme) i dodavanje inhibitora stanične diobe kako bi se postigla svrha brojanja samo živih bakterija.
U ovom eksperimentu, hemocitometar je korišten kao primjer za izvođenje direktnog brojanja pod mikroskopom. Za metode korištenja druga dva brojača bakterija pogledajte upute svakog proizvođača. Direktno brojanje pod mikroskopom s hemocitometrom je uobičajena metoda brojanja mikroba. Tabla za brojanje je posebno napravljen stakleni tobogan, na kojem četiri utora čine tri platforme; šira platforma u sredini podijeljena je na dvije polovine kratkim horizontalnim prorezom, a svaka strana platforme je obložena rešetkom. Svaka mreža je podijeljena na devet velikih kvadrata, a srednji veliki kvadrat je komora za brojanje. Skala sobe za brojanje općenito ima dvije specifikacije, jedna je da je veliki kvadrat podijeljen na 25 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 16 malih kvadrata; drugi je da je veliki kvadrat podijeljen na 16 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 25 malih kvadrata, ali bez obzira na vrstu ploče za brojanje, postoje 400 mala polja u svaki veliki kvadrat. Dužina stranice svakog velikog kvadrata je 1 mm, a tada je površina svakog velikog kvadrata 1 mm 2. Nakon što je pokrovno staklo pokriveno, visina između pokrovnog stakla i kliznog stakla je 0,1 mm, pa je zapremina komora za brojanje je 0,1 mm (jedan desethiljaditi dio mililitra).
