Određivanje broja mikroorganizama-Mikroskopska metoda direktnog brojanja!
Rast populacije bakterija se manifestuje povećanjem broja ćelija ili povećanjem ćelijskog materijala. Metode za određivanje broja ćelija uključuju direktno mikroskopsko prebrojavanje, broj ploča, procjenu zamućenosti spektrofotometrom, najvjerovatniji broj MPN i membransku filtraciju. (membranska filtracija) itd. Metode za mjerenje ćelijskih supstanci uključuju određivanje suhe težine ćelije, određivanje određenih ćelijskih komponenti kao što su sadržaj azota, RNK i DNK, i određivanje produkata metabolita. Ukratko, postoji mnogo metoda za mjerenje mikrobnog rasta, od kojih svaka ima svoje prednosti i nedostatke. Metodu treba odabrati u skladu sa specifičnim zahtjevima rada. Ovaj eksperiment uglavnom uvodi mikroskopsku metodu direktnog brojanja koja se obično koristi u proizvodnji i naučno-istraživačkom radu.
1. Zahtjevi namjene
1. Pojasnite princip brojanja pomoću ploče za brojanje krvnih zrnaca.
2. Savladajte metodu brojanja mikroorganizama pomoću ploče za brojanje krvnih zrnaca.
2. Osnovni principi
Metoda direktnog brojanja mikroskopom je jednostavna, brza i intuitivna metoda koja stavlja malu količinu suspenzije uzorka za testiranje na posebno stakalce s određenom površinom i zapreminom (koji se naziva i bakteriometar) i broji je direktno pod mikroskopom. Metode. Trenutno se najčešće koriste bakteriometri u zemlji i inostranstvu: hemocitometar, Peteroff-Hauser bakteriometar, Hawksley bakteriometar itd. Svi se mogu koristiti za brojanje kvasca, bakterija, spora plijesni i drugih suspenzija, a osnovni principi su isti. Posljednja dva brojača bakterija imaju ukupnu zapreminu od 0.02mm3 nakon što su prekrivena pokrivnim staklom, a razmak između pokrovnog stakla i stakala je samo 0,02 mm. Stoga se objektiv sa uranjanjem u ulje može koristiti za promatranje i otkrivanje manjih ćelija kao što su bakterije. count. Osim upotrebe ovih bakteriometara, postoji i metoda procjene koja direktno posmatra odnos površine razmaza i površine vidnog polja pod mikroskopom. Ova metoda se uglavnom koristi za bakteriološko ispitivanje mlijeka. Prednosti metode direktnog brojanja mikroskopa su da je intuitivan, brz i jednostavan za rukovanje. Međutim, nedostatak ove metode je što je izmjereni rezultat obično zbir mrtvih i živih bakterija. Trenutno postoje neke metode za prevazilaženje ovog nedostatka, kao što je kombiniranje živih bakterija, bojenje mikrokomorne kulture (kratko vrijeme) i dodavanje inhibitora stanične diobe kako bi se postigla svrha brojanja samo živih bakterija.
Ovaj eksperiment koristi hemocitometar kao primjer za provođenje direktnog brojanja pod mikroskopom. Za korištenje druga dva bakteriometra, molimo pogledajte upute svakog proizvođača. Direktno brojanje pod mikroskopom pomoću hemocitometra je uobičajena metoda brojanja mikroba. Ploča za brojanje je poseban tobogan sa četiri utora koji formiraju tri platforme; šira platforma u sredini podijeljena je na dvije polovine kratkim horizontalnim žlijebom, a sa svake strane platforme je mrežasta mreža. Svaka kvadratna mreža podijeljena je na devet velikih kvadrata, a veliki kvadrat u sredini je soba za brojanje. Struktura ploče za brojanje krvnih zrnaca prikazana je na slici {{0}}. Generalno, postoje dvije specifikacije za skalu komore za brojanje. Jedan je veliki kvadrat podijeljen na 25 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 16 malih kvadrata (slika 15-2); drugi je veliki kvadrat. Kvadratna mreža podijeljena je na 16 srednjih kvadrata, a svaki srednji kvadrat je podijeljen na 25 malih kvadrata. Međutim, bez obzira na vrstu ploče za brojanje, u svakom velikom kvadratu ima 400 malih kvadrata. Dužina stranice svakog velikog kvadrata je lmm, tada je površina svakog velikog kvadrata lmm2. Nakon što je pokrovno staklo pokriveno, visina između pokrovnog stakla i stakalca je 0,lmm, tako da je zapremina komore za brojanje 0,lmm3 (jedan desethiljaditi deo mililitra). Slika 15-1 Struktura ploče za brojanje krvnih zrnaca (1) Slika 15-2 Struktura ploče za brojanje krvnih zrnaca (2) A. Pogled sprijeda; B. Uzdužni presjek; uvećana kvadratna mreža, veliki kvadrat u sredini je komora za brojanje 1. Ploča za brojanje krvnih zrnaca; 2. Poklopac; 3. Kada brojite u komori za brojanje, obično izbrojite ukupan broj bakterija u pet kvadrata, zatim pronađite prosječnu vrijednost svakog kvadrata, a zatim pomnožite sa 25 ili 16 da dobijete Ukupan broj bakterija u velikom kvadratu se zatim pretvara u ukupan broj bakterija u 1ml bakterijske otopine. Pretpostavimo da je ukupan broj bakterija u pet srednjih kvadrata A, a faktor razrjeđenja bakterijske otopine B. Ako je to ploča za brojanje sa 25 srednjih kvadrata, onda je ukupan broj bakterija u 1 mL bakterijske otopine {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (komada) Na isti način, ako je ploča za brojanje sa 16 kvadrata, ukupan broj bakterija u 1mL bakterijskog rastvora {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (komadi),,
