Razlika između fluorescentnog mikroskopa i laserskog konfokalnog mikroskopa
fluorescentni mikroskop
1. Fluorescentni mikroskop koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti, koje se koristi za ozračivanje otkrivenog objekta kako bi emitovao fluorescenciju, a zatim promatranje oblika i položaja objekta pod mikroskopom. Fluorescencijski mikroskop se koristi za proučavanje apsorpcije, transporta, distribucije i lokacije hemijskih supstanci u ćelijama. Neke supstance u ćelijama, kao što je hlorofil, mogu fluorescirati nakon zračenja ultraljubičastim zracima; Druge tvari ne mogu fluorescirati same, ali mogu fluorescirati nakon što su obojene fluorescentnim bojama ili fluorescentnim antitijelima i ozračene ultraljubičastim zracima. Fluorescencijski mikroskop je jedan od alata za kvalitativna i kvantitativna istraživanja ovih supstanci.
2, princip fluorescentnog mikroskopa:
(a) Izvor svjetlosti: Izvor svjetlosti zrači svjetlost različitih talasnih dužina (od ultraljubičastog do infracrvenog).
(b) Izvor svjetlosti ekscitacionog filtera: emituje svjetlost sa specifičnom talasnom dužinom koja može učiniti da uzorak fluorescira, dok blokira svjetlost koja je beskorisna za fluorescenciju ekscitacije.
(c) Fluorescentni uzorci: uglavnom obojeni fluorescentnim pigmentima.
(d) Filter za blokiranje: blokirajuće pobudno svjetlo koje uzorak ne apsorbira da bi selektivno prenio fluorescenciju, a neke valne dužine u fluorescenciji se također selektivno prenose. Mikroskop koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti da bi ozračeni predmet emitovao fluorescenciju. Elektronski mikroskop su prvi sastavili Knohl i Ha Roska u Berlinu 1931. Ovaj mikroskop koristi brzi elektronski snop umjesto svjetlosnog snopa. Budući da je talasna dužina toka elektrona mnogo kraća od talasne dužine svetlosnog talasa, uvećanje elektronskog mikroskopa može dostići 800 hiljada puta, a minimalna granica rezolucije je 0,2 nanometra. Skenirajući elektronski mikroskop, koji se počeo koristiti 1963. godine, može natjerati ljude da vide sićušne strukture na površini objekata.
3. Opseg primjene: koristi se za povećanje slike sićušnih objekata. Općenito se primjenjuje na promatranje biologije, medicine i mikroskopskih čestica.
Konfokalni mikroskop
1. Konfokalni mikroskop dodaje polureflektirajuću polu-leću na optičku putanju reflektirane svjetlosti, koja reflektira svjetlost koja je prošla kroz sočivo u drugim smjerovima. U njenom fokusu je pregrada sa rupicom, a rupica se nalazi u fokusu. Iza pregrade nalazi se fotoumnožačka cijev. Može se zamisliti da reflektovana svjetlost prije i nakon fokusa svjetlosti detekcije prođe kroz ovaj konfokalni sistem, i neće biti fokusirana na malu rupu, već će biti blokirana pregradom. Dakle, fotometar mjeri intenzitet reflektirane svjetlosti u fokusu.
2. Princip: Tradicionalni optički mikroskop koristi izvor svjetlosti polja, a slika svake tačke na uzorku će biti ometena difrakcijom ili raspršenom svjetlošću susjednih tačaka; Laserski skenirajući konfokalni mikroskop skenira svaku tačku žarišne ravni u uzorku koristeći tačkasti izvor svjetlosti formiran laserskim snopom koji prolazi kroz otvor za osvjetljenje. Ozračena tačka na uzorku se snima na otvoru za detekciju, koji se prima tačku po tačku ili liniju po tačku pomoću fotomultiplikatora (PMT) ili hladno spojenog uređaja (cCCD) nakon detekcije rupice, a fluorescentna slika se brzo formira na ekran monitora kompjutera. Rupica za osvjetljenje i rupica za detekciju su konjugirani u odnosu na žižnu ravan objektivnog sočiva, a tačke u žarišnoj ravni se istovremeno fokusiraju na otvor za osvjetljenje i rupicu za emitiranje, a točke izvan žarišne ravni neće biti snimljen na otvoru za detekciju, tako da dobijena konfokalna slika predstavlja optički poprečni presek uzorka, koji prevazilazi nedostatak zamućene slike običnog mikroskopa.
3. Područja primjene: uključujući medicinu, istraživanje životinja i biljaka, biohemiju, bakteriologiju, ćelijsku biologiju, nauku o tkivima i embrionima, nauku o hrani, genetiku, farmakologiju, fiziologiju, optiku, patologiju, botaniku, neuronauku, biologiju mora, nauku o materijalima, elektronsku nauku, mehanika, geologija nafte i mineralogija.
