Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa
Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa, fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa je različita, ne posmatra se uzorak kroz osvjetljenje običnog izvora svjetlosti, već korištenje određene valne dužine svjetlosti (obično ultraljubičaste, plavo-ljubičaste) ekscitacija uzorka pod mikroskopom unutar fluorescentnog materijala, tako da emituje fluorescentno svjetlo, tako da uloga fluorescentnog mikroskopa u izvoru svjetlosti nije direktno osvjetljenje, već kao vrsta stimulacije uzoraka fluorescencije unutrašnje svjetlosti. izvor fluorescentnog mikroskopa nije direktno osvjetljenje, već kao izvor energije za stimulaciju fluorescentne tvari unutar uzorka. Razlog zašto možemo promatrati uzorak nije osvjetljenje izvora svjetlosti, već fenomen fluorescencije koji predstavlja fluorescentna supstanca u uzorku nakon apsorpcije pobuđene svjetlosne energije. Vidi se da su karakteristike fluorescentnog mikroskopa uglavnom u tome što njegov izvor svjetlosti može opskrbiti veliki broj specifičnih raspona talasnih dužina ekscitacijske svjetlosti, tako da fluorescentne tvari unutar ispitivanog uzorka mogu dobiti potreban intenzitet ekscitacijske svjetlosti. Istovremeno, fluorescentni mikroskop mora imati odgovarajući sistem filtera. Fluorescentni mikroskop je osnovni alat za **fluorescentnu histohemiju. Sastoji se od izvora svjetlosti ultra visokog pritiska, sistema filtera (uključujući filtersku ploču za pobuđivanje i supresiju), optičkog sistema i fotografskog sistema i drugih glavnih komponenti, je upotreba određene talasne dužine svetlosti da stimuliše uzorak da emituje fluorescenciju.
1. način pobuđivanja fluorescencije: prema rasponu talasne dužine svjetlosti dijeli se na metodu UV ekscitacije (koristeći ultraljubičasto osvjetljenje) i BV metodu ekscitacije (koristeći plavo ljubičasto svjetlo) dvije vrste metode UV ekscitacije kraće od 400nm u blizini ultraljubičastog svjetla za uzbuđenje. U ovoj metodi nema vidljive ekscitacijske svjetlosti, tako da uočena fluorescencija pokazuje inherentnu fluorescenciju boje i lako je razlikovati specifičnu fluorescenciju na uzorku od samofluorescencije pozadinskog tkiva.
2. BV metoda ekscitacije: Metoda je centrirana na 404nm, 434nm od ultraljubičastog do plavog svjetla za ekscitaciju. Ova metoda koristi plavo svjetlo za ozračivanje uzorka, tako da granični filter sistema za posmatranje fluorescencije mora koristiti filter koji može u potpunosti blokirati plavo svjetlo i u potpunosti proći željenu zelenu i žutu fluorescenciju. Fluorescentni pigmenti za metodu fluorescentnih antitijela. Pošto su talasna dužina maksimalne apsorpcije ekscitacionog svetla i talasna dužina maksimalne emisije fluorescencije bliske jedna drugoj, filteri koji se koriste u BV metodi ekscitacije moraju biti oštri filteri za odsecanje. Ova metoda koristi plavo svjetlo kao pobudno svjetlo, tako da je efikasnost apsorpcije fluorohroma veća i može se dobiti svjetlija slika. Nedostatak je što se fluorescencija ispod 500 nm ne može vidjeti, a iznad 500 nm cijela slika je žuta. U metodi fluorescentnih antitijela, većina specifičnosti se procjenjuje prema boji jedinstvenoj za fluorohrom, tako da nedostaci metode ekscitacije BV koja je gore opisana imaju tendenciju da budu izuzetno utjecajni kada se raspravlja o suptilnoj specifičnosti.
