Razlike između fluorescentne mikroskopije i konfokalne mikroskopije
Fluorescentno mikroskop
1. Fluorescentni mikroskop koristi ultraljubičasto svjetlo kao svjetlosni izvor da se ozrači objekt koji se prevodi, uzrokujući da se emitira fluorescencija, a zatim promatraju oblik i položaj objekta ispod mikroskopa. Mikroskopija fluorescencije koristi se za proučavanje apsorpcije, transporta, distribucije i lokalizacije tvari unutar ćelija. Neke supstance u ćelijama, poput hlorofila, mogu fluorescirati kada su izložene ultraljubičastom zračenju; Postoje i neke tvari koje ne mogu emitirati same fluorescencije, ali mogu emitirati i fluorescencija ako se oboje sa fluorescentnim bojama ili fluorescentnim antitijevima i ozračenim ultraljubičastom svjetlom. Mikroskopija fluorescencije jedan je od alata za kvalitativna i kvantitativna istraživanja na takvim tvarima.
2. Princip fluorescentnog mikroskopa:
(A) Izvor svetlosti: Izvor svetlosti emitira svjetlost različitih talasnih dužina (od ultraljubičastog do infracrvenog).
(B) Izvor filtra za uzbuđenje: prenošenje svjetlosti specifične valne duljine koje može prouzrokovati fluorescentnost u uzorku, dok blokira svjetlost koja je beskorisna za uzbudljivu fluorescenciju.
(C) Fluorescentni uzorci: obično obojeni fluorescentnim pigmentima.
(D) Blokiranje filtra: Selektivno prenosi fluorescenciju blokiranjem uzbuđenja koja ne apsorbira uzorak, a neke talasne dužine u fluorescenciranju također se selektivno prenosi. Mikroskop koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao svijetlo izvor kako bi se osvijetljeno objekt emitirao fluorescenciju. Elektronski mikroskop prvo je sastavio Knorr i Haruska u Berlinu, Nemačka 1931. godine. Ovaj mikroskop koristi velike brzine elektron umjesto svjetlosnih greda. Zbog znatne kraće talasne dužine protoka elektrona u usporedbi sa lakim valovima, uvećanje elektronskog mikroskopa može dostići 8 0 0000 puta, sa minimalnom granicom rezolucije od 0,2 nanometara. Mikroskop elektrona skeniranja, koji se prvi put koristio 1963. godine, omogućava ljudima da vide sićušne konstrukcije na površini objekata.
3. Opseg aplikacije: Koristi se za povećanje slika malih predmeta. Općenito se koristi za zapažanja biologije, medicine, mikroskopske čestice itd.
Confocal Microskop
1. CONFOCAL mikroskop dodaje polu reflektirajuću polovinu objektiva na reflektirani svjetlosni put, koji odbija reflektiranu svjetlost koja je prolazila kroz objektiv u drugim smjerovima. U njegovom žarišnom trenutku nalazi se pregrada s pilingom koja se nalazi u središnjoj tački, a iza pregrada je fotomultiplijska cijev. Može se zamisliti da se refleksija svjetlost prije i nakon svjetla za otkrivanje ne može fokusirati na malu rupu kroz ovaj konfokalni sustav i blokirat će se pregradama. Dakle, fotometar mjeri reflektirani intenzitet svjetlosti u žarištu.
2. Princip: Tradicionalni optički mikroskopi koriste izvore terenskog polja, a slika svake tačke na uzorku utječe difrakcija ili raštrkana svjetlost iz susjednih mjesta; Lasersko skeniranje Confocal Microskop koristi laserski snop za osvjetljavanje otvora i formiranje izvora svjetlosti tačke za skeniranje svake točke na žarišnu ravninu uzoraka. Osvetljeni točki na uzoru ima se na detekciji i primljenim tački po tački ili linijskom fotomultiplijskom cijevi (PMT) ili uređajem za hladni spoj (CCCD) nakon otkrivanja pilinge, brzo formira fluorescentnu sliku na ekranu monitora računara. Propeklo za osvjetljenje i otvor za otkrivanje konjugiraju su u odnosu na žarišnu ravninu objektivnog sočiva. Točke na žarišnu ravninu su istovremeno fokusirane na osvjetljenje i proklizavanje emisija, a bodovi izvan žarišne ravnine neće se dobiti na otvor za otkrivanje. Rezultirajuća konfokalna slika je optički presjek uzorka, prevladavajući nedostatak zamagljenih slika u općim mikroskopima.
