Metode i mjere opreza upotrebe fluorescentnog mikroskopa
Način upotrebe:
(1) Postavite list materijala na nosač.
(2) Uključite regulator napona fluorescentnog mikroskopa. Zatim pritisnite startnu grupu da se upali UV lampa ne smije se gasiti 15 minuta, i ne smije se ponovo pokretati 3 minute nakon što se isključi.
(3) Okrenite ekscitacioni filter na v, dikroični film na v, odaberite 495 ili 475nm filter za blokiranje.
(4) Odaberite uvFL40, uvFL100 fluorescentni prijemni mikroskopiju objektiva.
(5) Dodajte nefluorescentno ulje na stakalcu, prvo 40 x, a zatim 100 x fokusirajući mikroskopski. Prikaži fluorescenciju.
(7) Budući da je fluorescentni materijal ultraljubičastim zračenjem s rastom fluorescencije vremenom postupno slabio, tako da mikroskopski pregled treba često mijenjati vidno polje.
(8) takođe može koristiti uvFL10 ili uvFL20 mikroskopski materijal sa malim povećanjem (sa malim povećanjem bez dodavanja nefluorescentnog ulja).
Metoda snimanja fluorescentne slike:
Fluorescentna slika viđena fluorescentnim mikroskopom, jedna je sa morfološkim karakteristikama, druga je sa bojom i svjetlinom fluorescencije, u ocjenjivanju rezultata, to dvoje se mora kombinovati sa sveobuhvatnom prosudbom. Rezultati se evidentiraju prema subjektivnim pokazateljima, odnosno vizuelnim posmatranjem od strane radnika. Kao opće kvalitativno zapažanje, u osnovi pouzdano. Sa razvojem tehnologije i nauke, u različitom stepenu, korišćenje objektivnih indikatora za beleženje rezultata prosuđivanja, kao što je upotreba ćelijskog spektrofotometra, analizatora slike i drugih instrumenata. Međutim, rezultati zabilježeni ovim instrumentima također se moraju kombinovati sa subjektivnim prosuđivanjem.
Tehnologija fotografisanja fluorescentnim mikroskopom je veoma neophodna za snimanje fluorescentnih slika, jer se fluorescencija lako izbledi i oslabi, da bi se trenutno zabeležili rezultati fotografije. Metoda je u osnovi ista kao obična mikrografija. Samo trebate koristiti brzi fotografski film kao što je ASA200 iznad ili 24. iznad. Budući da je ultraljubičasto svjetlo na efektu fluorescentnog praska, kao što su FITC markeri, u zračenju ultraljubičastom svjetlošću 30s, svjetlina fluorescencije smanjena je za 50%. Stoga je brzina ekspozicije suviše mala da bi se uhvatila fluorescentna slika. Fluorescencijski mikroskopi za opšta istraživanja imaju poluautomatske ili potpuno automatske uređaje za mikrofotografiju.
Mjere predostrožnosti:
(1) Radite u strogom skladu sa zahtjevima fabričkog priručnika za fluorescentni mikroskop, ne mijenjajte postupak proizvoljno.
(2) Pregled treba obaviti u tamnoj prostoriji. Nakon što uđete u mračnu prostoriju, priključite napajanje, upalite živinu lampu ultra visokog pritiska na 5-15min, sačekajte dok izvor svjetlosti ne emituje jako svjetlo da se stabilizuje i oči se potpuno prilagode tamnoj prostoriji, i zatim počnite posmatrati uzorak.
(3) Da biste spriječili oštećenje očiju od ultraljubičastog svjetla, prilikom podešavanja izvora svjetlosti treba nositi zaštitne naočale.
(4) provjeriti vrijeme svaki put do 1 ~ 2h je prikladno, više od 90 min, ultra-visokog pritiska živine lampe svjetlosni intenzitet postupno opada, fluorescencija je oslabljena; uzorci ozračeni ultraljubičastim svjetlom 3 ~ 5 min, fluorescencija je također značajno oslabljena; stoga, * ne smije biti duže od 2 ~ 3h.
(5) Život izvora svjetlosti fluorescentnog mikroskopa je ograničen, uzorak bi trebao biti centraliziran za pregled, kako bi se uštedjelo vrijeme i zaštitio izvor svjetlosti. Kada je vruće treba dodati hlađenje ventilatorom, novu sijalicu snimiti od početka korištenja vremena. Kada se lampa ugasi i želi da se ponovo upotrebi, sijalica se mora dovoljno ohladiti pre paljenja. Izvor svjetlosti treba izbjegavati nekoliko puta.
(6) Posmatrajte uzorak odmah nakon bojenja, jer će se fluorescencija postepeno smanjivati tokom vremena. Ako se uzorak stavi u polietilensku plastičnu vrećicu pohranjenu na 4 stepena, može odgoditi vrijeme slabljenja fluorescencije i spriječiti isparavanje sredstva za zaptivanje.
(7) Kriterijumi prosuđivanja za jačinu fluorescencije: generalno podeljeno na četiri nivoa, tj. 'jedan' - nema ili je vidljiva slaba fluorescencija. '+' - samo jasna vidljiva fluorescencija. '+ +' - vidljivo sa svijetlim
