Fluorescentni mikroskopi su klasifikovani u dva tipa na osnovu njihovog optičkog puta:
1. Transmisioni fluorescentni mikroskop: Izvor ekscitacije svjetlosti se koristi za pobuđivanje fluorescencije prolaskom kroz materijal uzorka kroz kondenzatorsko sočivo. Uobičajeni koncentratori tamnog polja također se mogu koristiti, a obični koncentratori se mogu koristiti za podešavanje reflektora za preusmjeravanje i bočno usmjerenje ekscitacijske svjetlosti na uzorak. Ovo je relativno star{3}}modni fluorescentni mikroskop. Njegova prednost je jaka fluorescencija pri malom uvećanju, ali nedostatak je što se fluorescencija smanjuje sa povećanjem. Stoga je bolje posmatrati veće materijale uzoraka.
2. Fluorescencijski mikroskop sa padajućim svjetlom je nova vrsta fluorescentnog mikroskopa razvijena u moderno doba. Za razliku od gore navedenog, ekscitacijsko svjetlo pada sa sočiva objektiva prema dolje na površinu uzorka, koristeći isto sočivo objektiva kao i kondenzator osvjetljenja i objektiv objektiva za prikupljanje fluorescencije. Dvobojni razdjelnik snopa treba dodati na optičku putanju, koja je udaljena 45 stepeni od laganog uranijuma. Ugao, ekscitacijsko svjetlo se reflektira u objektiv objektiva i fokusira na uzorak. Fluorescencija koju generira uzorak, kao i ekscitacijsko svjetlo reflektirano od površine sočiva objektiva i pokrovnog stakla, ulaze u sočivo objektiva i vraćaju se u razdjelnik snopa s dvije boje, odvajajući ekscitacijsko svjetlo i fluorescenciju. Filter za blokiranje apsorbuje preostalo pobudno svjetlo. Ako se koriste različite kombinacije ekscitacionih filtera/dvobojnih separatora zraka/filtara za blokiranje, one mogu zadovoljiti potrebe različitih fluorescentnih reakcijskih proizvoda. Prednosti ovog fluorescentnog mikroskopa su jednolično osvetljenje polja, jasna slika i jača fluorescencija sa većim uvećanjem.
(2) Uputstvo za upotrebu fluorescentnog mikroskopa
1. Uključite izvor svjetlosti. Živinu lampu ultra-visokog pritiska potrebno je prethodno zagrijati nekoliko minuta kako bi postigla maksimalnu svjetlinu.
2. Transmisiona fluorescentna mikroskopija zahtijeva ugradnju potrebnog ekscitacionog filtera između izvora lampe i kondenzatora i odgovarajućeg filtera za blokiranje iza objektiva. Fluorescencijski mikroskop sa padajućim svjetlom treba da ubaci potrebni filter za pobuđivanje/dvobojni razdjelnik zraka/blok filtera za blokiranje u prorez optičke staze.
3. Posmatrajte mikroskopom male snage-i podesite centar izvora svjetlosti u skladu sa uređajem za podešavanje različitih tipova fluorescentnih mikroskopa, tako da se nalazi u centru cijele tačke osvjetljenja.
4. Postavite uzorak i fokusirajte ga za posmatranje. Treba obratiti pažnju tokom upotrebe: Nemojte direktno posmatrati očima pre postavljanja filtera da biste izbegli oštećenje oka; Kada se uzorci posmatraju uljnim mikroskopom, mora se koristiti poseban nefluorescentni mikroskop za ulje; Nakon što se živina lampa visokog pritiska-ugasi, ne može se odmah ponovo uključiti. Potrebno je 5 minuta da se ponovo pokrene, inače će biti nestabilan i uticati na životni vijek živine lampe.
(3) Posmatranjem pod fluorescentnim mikroskopom na platformi za učenje pomoću filtera plavoljubičastog svjetla, mogu se vidjeti ćelije obojene sa 0,01% akridin narandžaste fluorescentne boje. Jezgro i citoplazma su pobuđeni da proizvode dvije različite boje fluorescencije (tamno zelenu i narandžasto crvenu).
