Metoda detekcije fluorescentne mikroskopije
fluorescentni mikroskop
Fluorescentna mikroskopija je osnovni alat za imunofluorescentnu citohemiju. Sastoji se od glavnih komponenti kao što su izvor svjetlosti, sistem filterskih ploča i optički sistem. Koristi određenu talasnu dužinu svetlosti da pobuđuje uzorak i emituje fluorescenciju, koja se uvećava kroz sistem objektiva i okulara da bi se posmatrala fluorescentna slika uzorka (slika 1).
(1) Izvor svjetlosti
Danas se kao izvor svjetlosti najčešće koristi živina lampa od 200 W ultra visokog pritiska. Izrađen je od kvarcnog stakla, sfernog oblika u sredini i određenom količinom žive punjene unutra. Tokom rada, pražnjenje između dvije elektrode uzrokuje isparavanje žive, a pritisak unutar sfere brzo raste. Kada živa potpuno ispari, može dostići 50-70 standardne atmosferske pritiske, što općenito traje oko 5-15 minuta. Luminiscencija živinih lampi ultravisokog pritiska rezultat je pražnjenja između elektroda, koje kontinuirano disocira i smanjuje molekule žive i emituje fotone. Emituje jako ultraljubičasto i plavoljubičasto svjetlo, koje je dovoljno da pobuđuje različite fluorescentne tvari, stoga se široko koristi u fluorescentnim mikroskopima.
Mjere opreza za korištenje fluorescentnog mikroskopa
(1) Striktno se pridržavajte uputstava tvornice fluorescentnog mikroskopa i ne mijenjajte program proizvoljno.
(2) Pregled se obavlja u mračnoj prostoriji. Nakon što uđete u mračnu prostoriju, priključite napajanje i upalite živinu lampu ultra visokog pritiska na 5-15 minuta. Nakon što izvor svjetlosti emituje jako svjetlo i stabilizira se, oči bi se trebale u potpunosti prilagoditi mračnoj prostoriji prije nego što počnu promatrati uzorak.
(3) Da biste spriječili UV oštećenje očiju, treba nositi zaštitne naočale prilikom podešavanja izvora svjetlosti.
(4) Vrijeme inspekcije treba svaki put biti 1-2 sati. Ako prelazi 90 minuta, intenzitet svjetlosti živine lampe ultravisokog pritiska postepeno se smanjuje i fluorescencija slabi; Uzorci izloženi ultraljubičastom zračenju 3-5 dana
Nakon min, fluorescencija je također značajno smanjena; Dakle, maksimalno trajanje ne bi trebalo da prelazi 2-3 sati.
(5) Životni vijek izvora svjetlosti fluorescentnog mikroskopa je ograničen, a uzorak treba centralno pregledati kako bi se uštedjelo vrijeme
Uštedite vrijeme i zaštitite izvor svjetlosti. Kada je vruće vrijeme, treba dodati električni ventilator za odvođenje topline i hlađenje. Prilikom zamjene nove sijalice vrijeme korištenja treba evidentirati od početka. Kada se svjetlo ugasi i želite ga ponovo koristiti, morate pričekati da se sijalica dovoljno ohladi prije nego što je upalite. Izbjegavajte paljenje izvora svjetlosti nekoliko puta dnevno.
(6) Posmatrajte uzorak odmah nakon bojenja, jer će fluorescencija postepeno slabiti tokom vremena. Ako se uzorak čuva u polietilenskoj plastičnoj vrećici na 4 stepena, to može odgoditi vrijeme slabljenja fluorescencije i spriječiti isparavanje sredstva za montažu.
(7) Kriterijumi prosuđivanja za jačinu fluorescencije su generalno podeljeni na četiri nivoa, odnosno "jedan" - nikakva ili vidljiva slaba fluorescencija. "+" - Vidljiva je samo vidljiva fluorescencija. ++- Vidljivo sa jakom fluorescencijom. "+++" - Vidljiva i zasljepljujuća fluorescencija.
