Principi i strukturne karakteristike fluorescentne mikroskopije
Fluorescentna mikroskopija je upotreba visoke efikasnosti luminiscencije tačke, kroz filtraciju sistema boja da emituje određenu talasnu dužinu svetlosti (kao što je ultraljubičasto 3650 u ili ljubičasto-plavo 4200 u) kao ekscitaciono svetlo, ekscitacija fluorescentnog materijala unutar uzorka emituje niz različitih boja fluorescencije, a zatim se uvećava kroz objektiv i okulare za posmatranje. Na taj način, u pozadini jakog kontrasta, čak i ako je fluorescencija vrlo slaba, lako se prepoznaje, visoka osjetljivost, uglavnom se koristi za proučavanje strukture i funkcije ćelije i hemijskog sastava. Osnovna struktura fluorescentnog mikroskopa sastoji se od običnog optičkog mikroskopa plus nekih dodataka (kao što su fluorescentni izvor svjetlosti, ekscitacijski filteri, separator zraka u dvije boje i filteri za blokiranje, itd.). Fluorescentni izvor svjetlosti - općenito korištena živina lampa ultravisokog pritiska (50-200W), koja može emitovati različite valne dužine svjetlosti, ali svaki fluorescentni materijal ima najjaču talasnu dužinu pobuđivanja fluorescencije, tako da je potrebno dodati filtere za pobuđivanje (općenito ultraljubičasti, ljubičasti, plavi i zeleni ekscitacioni filter), tako da samo određena talasna dužina ekscitacionog svetla kroz zračenje uzoraka, dok se druga svetlost apsorbuje. Zato je potrebno dodati ekscitacioni filter (obično ultraljubičasti, ljubičasti, plavi i zeleni ekscitacioni filteri), tako da se kroz uzorak apsorbuje samo određena talasna dužina ekscitacione svetlosti, dok se druga svetlost apsorbuje. Kada je svaka supstanca ozračena ekscitacionim svetlom, emituje vidljivu fluorescenciju veće talasne dužine od one ozračene svetlosti u vrlo kratkom vremenu. Fluorescencija ima specifičnost, generalno slabiju od ekscitacijske svjetlosti, da bi se mogla promatrati specifična fluorescencija, sočivo objektiva iza potrebe za dodavanjem blokiranja (ili supresije) mora biti odabrano za korištenje.
Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog mikroskopa
1. Metoda osvjetljenja je obično padajuće, odnosno izvor svjetlosti se projektuje na uzorak kroz sočivo objektiva;
2. Izvor svjetlosti je ultraljubičasto svjetlo, sa kraćom talasnom dužinom i većom moći razlučivanja od običnih mikroskopa;
3. Postoje dva specijalna filtera, onaj ispred izvora svjetlosti se koristi za filtriranje vidljive svjetlosti, a onaj između okulara i objektiva se koristi za filtriranje ultraljubičastog svjetla radi zaštite ljudskog oka.
Fluorescencijski mikroskop je također vrsta optičkog mikroskopa, glavna razlika je u tome što su talasne dužine pobuđivanja različite. Ovo određuje strukturu fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa i upotrebu različitih metoda.
Fluorescencijski mikroskop je osnovni alat za imunofluorescentnu citohemiju. Sastoji se od izvora svjetlosti, sistema filterskih ploča i optičkog sistema i drugih glavnih komponenti. Koristi određenu talasnu dužinu svetlosti da stimuliše uzorak da emituje fluorescenciju, koja se uvećava kroz sočivo objektiva i sistem okulara kako bi se posmatrala fluorescentna slika uzorka.
