Tehnički parametri fluorescentne mikroskopije Tehnike i metode fluorescentne mikroskopije
Tehnički parametri fluorescentnog mikroskopa 1. Širokokutni okular 2. Akromatsko sočivo objektiva 3. Konvertor sočiva objektiva sa četiri otvora 4. Epifluorescentni uređaj Plavi (B) Zeleni (G) sistem pobude 100W živina lampa 5. Koaksijalni mehanizam za grubo i fino podešavanje fokusa: podešavanje Opseg fokusa: 15 mm Vrijednost mikropokretanja mreže: 0,002 mm 6. Dvoslojni mehanički sto Opseg uzdužnog kretanja: 70 mm Opseg bočnog kretanja: 50 mm
Tehnički parametri fluorescentnog mikroskopa
1. Širokougaoni okular
2. Akromatsko sočivo objektiva
3. Nosnik sa četiri otvora
4. Epifluorescentni uređaj plava (B) zelena (G) sistem pobude 100W živina lampa
5. Koaksijalni mehanizam za grubo i fino podešavanje fokusa: raspon fokusa 15 mm fino kretanje mreže vrijednost 0.002 mm
6. Dvoslojni mehanički radni sto
Opseg vertikalnog pomeranja: 70 mm Opseg bočnog pomeranja: 50 mm
Vještine i metode fluorescentne mikroskopije
(1) Stakleni tobogan
Debljina stakala treba da bude između 0.8 i 1.2mm. Predebeo tobogan će apsorbirati više svjetla s jedne strane, a s druge strane, pobudna svjetlost se ne može koncentrirati na uzorak. Stakalca moraju biti glatka, ujednačene debljine i bez očigledne autofluorescencije. Ponekad se koriste dijapozitivi od kvarcnog stakla.
(2) Poklopno staklo
Debljina pokrovnog stakla je oko 0.17 mm, glatko. Kako bi se pojačalo pobudno svjetlo, može se koristiti i interferentno pokrivno staklo, koje je posebno pokrovno staklo presvučeno s nekoliko slojeva tvari (kao što je magnezij fluorid) koje imaju različite interferentne efekte na svjetlost različitih valnih dužina, što može uzrokovati fluorescencija ide glatko. Uzbudljiva svjetlost prolazi kroz i reflektuje se, a ova reflektovana pobudna svjetlost pobuđuje uzorak.
(3) Primerak
Kriške tkiva ili drugi uzorci ne bi trebali biti previše debeli. Ako je predebeo, najveći dio ekscitacijske svjetlosti će biti utrošen u donjem dijelu uzorka, dok gornji dio koji direktno posmatra sočivo objektiva neće biti u potpunosti pobuđen. Pored toga, preklapanje ćelija ili pokrivanje nečistoća, utiču na procenu.
(4) Sredstvo za montažu
Glicerin se obično koristi kao sredstvo za montažu, koji ne smije imati autofluorescenciju, bezbojan je i providan, a svjetlina fluorescencije je svjetlija na pH 8.5-9.5 i nije lako brzo izblijediti. Stoga se kao sredstvo za montažu obično koristi jednaka mješavina glicerola i 0.5mol/l otopine karbonatnog pufera sa pH od 9.0 do 9.5.
(5) ulje za ogledalo
Općenito, kada se uzorci promatraju fluorescentnim mikroskopima tamnog polja i uljnim imerzionim sočivima, mora se koristiti imersiono ulje. Najbolje je koristiti specijalno nefluorescentno ulje za uranjanje. Umjesto toga se može koristiti i gornji glicerin, a može se koristiti i tekući parafin, ali je indeks prelamanja nizak, što ima blagi utjecaj na kvalitetu slike. Uticaj.
Princip i strukturne karakteristike fluorescentnog mikroskopa
Fluorescentna mikroskopija koristi tačku sa visokom svetlosnom efikasnošću da emituje svetlost određene talasne dužine (kao što je ultraljubičasto svetlo 3650 in ili ljubičasto plavo svetlo 4200 in) kroz sistem filtera kao ekscitaciono svetlo da pobuđuje fluorescentne supstance u uzorku da emituje fluorescenciju razne boje Nakon toga, posmatrajte kroz uvećanje objektiva i okulara. Na ovaj način, pod jakom kontrastnom pozadinom, čak i ako je fluorescencija vrlo slaba, lako se prepoznaje i ima visoku osjetljivost. Uglavnom se koristi za istraživanje strukture i funkcije ćelije i hemijskog sastava. Osnovna struktura fluorescentnog mikroskopa sastoji se od običnog optičkog mikroskopa plus neke dodatne opreme (kao što je fluorescentni izvor svjetlosti, ekscitacijski filter, dvobojni razdjelnik zraka i filter za blokiranje, itd.). Fluorescentni izvor svjetlosti—uglavnom koristite živinu lampu ultra visokog pritiska (50-200W), koja može emitovati svjetlost različitih talasnih dužina, ali svaka fluorescentna supstanca ima talasnu dužinu pobuđivanja koja proizvodi najjaču fluorescenciju, tako da filter za pobuđivanje (Općenito, postoje ultraljubičasti, ljubičasti, plavi i zeleni ekscitacioni filteri), koji dozvoljavaju samo ekscitacionoj svetlosti određene talasne dužine da prođe i ozrači uzorak, dok apsorbuje drugu svetlost. Nakon što je svaka supstanca ozračena ekscitacionim svjetlom, emituje vidljivu fluorescenciju sa većom valnom dužinom od talasne dužine zračenja za vrlo kratko vrijeme. Fluorescencija je specifična i općenito slabija od ekscitacijske svjetlosti. Da bi se uočila specifična fluorescencija, blokiranje (ili supresija) mora se dodati iza sočiva objektiva i koristiti zajedno s njim.
Razlika između fluorescentnog mikroskopa i običnog mikroskopa
1. Metoda osvjetljenja je obično episkopska, odnosno izvor svjetlosti se projektuje na uzorak kroz sočivo objektiva;
2. Izvor svjetlosti je ultraljubičasto svjetlo, valna dužina je kraća, a rezolucija je veća od one kod običnih mikroskopa;
3. Postoje dva specijalna filtera, onaj ispred izvora svjetlosti služi za filtriranje vidljive svjetlosti, a onaj između okulara i sočiva objektiva se koristi za filtriranje ultraljubičastih zraka radi zaštite ljudskog oka.
Fluorescencijski mikroskop je također vrsta optičkog mikroskopa, glavna razlika je u tome što je talasna dužina pobuđivanja različita. Ovo određuje razliku između fluorescentnog mikroskopa i običnog optičkog mikroskopa u smislu strukture i upotrebe.
Fluorescentna mikroskopija je suštinski alat u imunofluorescentnoj citohemiji. Sastoji se od glavnih komponenti kao što su izvor svjetlosti, sistem filterskih ploča i optički sistem. To je korištenje određene talasne dužine svjetlosti da se uzorak potakne da emituje fluorescenciju i da se posmatra fluorescentna slika uzorka pojačavanjem sočiva objektiva i sistema okulara.
