Kako se fluorescentna mikroskopija razlikuje od konfokalne laserske mikroskopije
Fluorescencijski mikroskop
1. Fluorescentni mikroskop koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti da osvijetli predmet koji se pregleda kako bi emitovao fluorescenciju, a zatim promatra oblik i lokaciju objekta pod mikroskopom. Fluorescentna mikroskopija se koristi za proučavanje apsorpcije i transporta supstanci unutar ćelija, kao i distribucije i pozicioniranja hemijskih supstanci. Neke supstance u ćelijama, kao što je hlorofil, mogu fluorescirati nakon zračenja ultraljubičastim zracima; neke tvari same po sebi ne mogu fluorescirati, ali ako su obojene fluorescentnim bojama ili fluorescentnim antitijelima, mogu fluorescirati nakon zračenja ultraljubičastim zracima. Fluorescentna mikroskopija je jedan od alata za kvalitativna i kvantitativna istraživanja takvih supstanci.
2. Princip fluorescentnog mikroskopa:
(A) Izvor svjetlosti: Izvor svjetlosti zrači svjetlost različitih talasnih dužina (od ultraljubičastog do infracrvenog).
(B) Izvor svjetlosti ekscitacionog filtera: prenosi svjetlost određene valne dužine koja može uzrokovati fluorescenciju uzorka, dok blokira svjetlost koja je beskorisna za stimulaciju fluorescencije.
(C) Fluorescentni uzorci: Uglavnom su obojeni fluorescentnim pigmentima.
(D) Filter za blokiranje: blokira ekscitacijsko svjetlo koje uzorak ne apsorbira i selektivno prenosi fluorescenciju. Neke valne dužine u fluorescenciji se također selektivno prenose. Mikroskop koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti da izazove fluoresciranje osvijetljenog objekta. Elektronski mikroskop su prvi put sklopili Knorr i Hallowska 1931. godine u Berlinu u Njemačkoj. Ovaj mikroskop koristi brzi snop elektrona umjesto svjetlosnog snopa. Pošto je talasna dužina protoka elektrona mnogo kraća od talasne dužine svetlosti, uvećanje elektronskog mikroskopa može da dostigne 800,000 puta, a minimalna granica rezolucije je 0,2 nanometra. Skenirajući elektronski mikroskop, koji je počeo da se koristi 1963. godine, omogućava ljudima da vide sićušne strukture na površini objekata.
3. Opseg primjene: Koristi se za povećanje slika malih objekata. Općenito se koristi u promatranju biologije, medicine, mikroskopskih čestica, itd.
konfokalni mikroskop
1. Konfokalni mikroskop dodaje polureflektirajuću polu-leću na optičku putanju reflektirane svjetlosti, koja reflektira svjetlost koja je prošla kroz sočivo u drugim smjerovima. U fokusu se nalazi pregrada sa rupom, a rupica se nalazi. U fokusnoj tački, iza pregrade, nalazi se fotomultiplikatorska cijev. Može se zamisliti da reflektovana svjetlost prije i nakon detekcije svjetlosnog fokusa prolazi kroz ovaj konfokalni sistem i ne može se fokusirati na malu rupu, te će biti blokirana pregradom. Dakle, ono što fotometar mjeri je intenzitet reflektirane svjetlosti u fokusu.
2. Princip: Tradicionalni optički mikroskopi koriste izvore svjetlosti na polju, a slika svake tačke na uzorku će biti ometana difrakcijom ili raspršenom svjetlošću iz susjednih tačaka; Konfokalni mikroskopi za lasersko skeniranje koriste laserske zrake za formiranje tačkastih izvora svjetlosti kroz osvjetljavajuće rupice za osvjetljavanje unutrašnjosti uzorka. Svaka tačka žarišne ravni se skenira, a osvijetljena tačka na uzorku se snima na rupici za detekciju, koju prima tačku po tačku ili liniju po liniju pomoću fotomultiplikatorske cijevi (PMT) ili uređaja za hladno spajanje (cCCD) iza detekcije. pinhole, i brzo se formira fluorescentna slika na ekranu monitora kompjutera. Rupa za osvetljenje i rupica za detekciju su konjugirani u odnosu na fokalnu ravan sočiva objektiva. Tačke na fokalnoj ravni su istovremeno fokusirane na otvor za osvetljenje i na emisionu rupicu. Tačke izvan fokalne ravni neće biti snimljene na otvoru za detekciju. Ovo se dobija Konfokalne slike su optički poprečni preseci uzoraka, koji prevazilaze nedostatke mutnih slika u običnim mikroskopima.
3. Područja primjene: Uključuju medicinu, naučna istraživanja životinja i biljaka, biohemiju, bakteriologiju, ćelijsku biologiju, embriologiju tkiva, nauku o hrani, genetiku, farmakologiju, fiziologiju, optiku, patologiju, botaniku, neuronauku, biologiju mora i nauku o materijalima, elektronsku nauku , mehanika, geologija nafte, mineralogija.
