Kako se fluorescentna mikroskopija razlikuje od laserske konfokalne mikroskopije
Fluorescencijski mikroskop
1, fluorescentni mikroskop je korištenje ultraljubičastog svjetla kao izvora svjetlosti, koji se koristi za ozračivanje predmeta koji se ispituje, tako da emituje fluorescenciju, a zatim promatra oblik objekta i njegovu lokaciju pod mikroskopom. Fluorescencijski mikroskop se koristi za proučavanje apsorpcije, transporta, distribucije i lokalizacije hemijskih supstanci u ćelijama. Neke supstance u ćeliji, kao što je hlorofil, mogu fluorescirati nakon zračenja ultraljubičastom svjetlošću; postoje neke supstance koje ne mogu fluorescirati same, ali ako su obojene fluorescentnim bojama ili fluorescentnim antitijelima, mogu fluorescirati i nakon zračenja ultraljubičastim svjetlom, a fluorescentna mikroskopija je jedan od alata za kvalitativno i kvantitativno istraživanje ove vrste tvari.
2, princip fluorescentnog mikroskopa:
(A) izvor svjetlosti: izvor svjetlosti zrači različite talasne dužine svjetlosti (od ultraljubičastog do infracrvenog).
(B) izvor ekscitacije filtera: kroz uzorak može proizvesti fluorescenciju određene valne dužine svjetlosti, dok blokira pobuđivanje beskorisne svjetlosti fluorescencije.
(C) Fluorescentni uzorak: uglavnom obojen fluorohromom.
(D) Blokirajući filteri: blokiraju pobuđujuću svjetlost koju uzorak ne apsorbira kako bi selektivno prenio fluorescenciju, a neke valne dužine u fluorescenciji se također selektivno prenose. Mikroskop koji koristi ultraljubičasto svjetlo kao izvor svjetlosti kako bi ozračeni predmet fluorescirao. Elektronski mikroskop su prvi put sklopili Knorr i Haroska 1931. godine u Berlinu u Njemačkoj. Ovaj mikroskop koristi brzi elektronski snop umjesto svjetlosnog snopa. Pošto je talasna dužina toka elektrona mnogo kraća od svetlosnog talasa, tako uvećanje elektronskog mikroskopa može biti do 800,000 puta, rezolucija minimalne granice od 0,2 nanometra . 1963. počeo je koristiti skenirajući elektronski mikroskop koji se može vidjeti na površini male strukture objekta.
3, opseg primjene: koristi se za povećanje slike sićušnih objekata. Općenito se koristi u biologiji, medicini, mikroskopskim česticama i drugim zapažanjima.
Konfokalni mikroskop
1, konfokalni mikroskop u reflektiranom svjetlu na cesti plus polu-reflektirajuća polu-leća, proći će kroz sočivo reflektirane svjetlosti presavijeno u drugim smjerovima, u fokusu na pregradu s rupom, rupa se nalazi u fokus, iza pregrade je fotomultiplikator. Može se zamisliti da reflektovana svjetlost prije i poslije žarišne točke svjetlosti detektora kroz ovaj set konfokalnog sistema, neće moći da se fokusira na malu rupu, biće blokirana pregradom. Dakle, fotometar mjeri intenzitet reflektirane svjetlosti u žarištu.
2, princip: tradicionalni optički mikroskop koristi izvor svjetlosti polja, slika svake tačke na uzorku će biti ometena difrakcijom ili raspršivanjem svjetlosti od susjednih tačaka; laserski skenirajući konfokalni mikroskop koristi laserski snop kroz osvjetljavajuću rupicu za formiranje tačkastog izvora svjetlosti na uzorku u fokalnoj ravni skeniranja svake tačke na uzorku, uzorak je ozračen, u detekciji rupice na slici , detekcijom rupice nakon fotomultiplikatora (PMT) ili uređaja za hladnu elektrospojnicu (cCCD) tačku po tačku ili tačku po tačku ili tačku po tačku, intenzitet svjetlosti se mjeri fotometrom. cCCD) prima tačku po tačku ili liniju po liniju i brzo formira fluorescentnu sliku na ekranu monitora računara. Rupica za osvjetljenje i rupica za detekciju u odnosu na žižnu ravan objektiva sočiva su konjugirana, tačka na žarišnoj ravni se istovremeno fokusira na rupicu za osvjetljenje i emisionu rupicu, tačka izvan fokusne ravnine neće biti u rupici za detekciju na slike, tako da je konfokalna slika uzorak optičkog poprečnog preseka, prevazilazeći nedostatke zamućenih slika običnih mikroskopa.
3, polja primjene: medicina, istraživanje životinja i biljaka, biokemija, bakteriologija, ćelijska biologija, embriologija tkiva, nauka o hrani, genetika, farmakologija, fiziologija, optika, patologija, botanika, neuronauka, biologija mora, nauka o materijalima, elektronska nauka, mehanika, naftna geologija, mineralogija.
