Poboljšane prednosti laserskog skenirajućeg multifotonskog mikroskopa
Laserski skenirajući multifotonski mikroskop je važno poboljšanje optičkog mikroskopa, koje uglavnom pokazuje da može promatrati duboku strukturu živih stanica, fiksnih stanica i tkiva, te može dobiti jasnu i oštru višeslojnu strukturu Z-ravni, odnosno optičke rezove. , koji se može koristiti za konstruiranje trodimenzionalne čvrste strukture uzoraka. Konfokalni mikroskop koristi laserski izvor svjetlosti, koji ispunjava cijelu stražnju žižnu ravan sočiva objektiva nakon proširenja, a zatim prolazi kroz sistem sočiva objektivnog sočiva kako bi se konvergirao u vrlo male tačke na fokalnoj ravni uzorka. Prema numeričkom otvoru objektiva, prečnik najsjajnije tačke osvetljenja je oko 0.25 ~ 0.8μm, a dubina je oko 0.5 ~ 1.5 μm .. Veličina fokusa kopolimerizacije zavisi od dizajna mikroskopa, talasne dužine lasera, karakteristika sočiva objektiva, podešavanja stanja jedinice skeniranja i svojstava uzorka. Opseg osvjetljenja i dubina polja mikroskopa su veoma veliki, dok je osvjetljenje konfokalnog mikroskopa koncentrisano na * * fokus na fokalnoj ravni. Najosnovnija prednost konfokalnog mikroskopa je ta što može napraviti fine optičke rezove debelih fluorescentnih uzoraka (koji mogu doseći 50 μm ili više), a debljina rezova je oko 0,5 do 1,5 μm. Niz slika optičkog preseka može se dobiti pomeranjem uzorka gore-dole pomoću koračnog motora mikroskopa po Z-osi. Prikupljanje informacija o slici kontroliše se u prvoj ravni i neće biti ometano signalima sa drugih pozicija na uzorku. Nakon uklanjanja uticaja pozadinske fluorescencije i povećanja odnosa signal-šum, kontrast i rezolucija konfokalne slike su očigledno poboljšani u poređenju sa tradicionalnom fluorescentnom slikom osvetljenja polja. U mnogim uzorcima, mnoge zamršene strukturne komponente su isprepletene da formiraju složen sistem, ali kada se prikupi dovoljno optičkih sekcija, možemo ih rekonstruisati u tri dimenzije pomoću softvera. Ova eksperimentalna metoda se široko koristi u biološkim istraživanjima kako bi se razjasnio složeni strukturni i funkcionalni odnos između stanica ili tkiva.
