Uvod u višefotonsku lasersku skenirajuću mikroskopiju: prednosti i nedostaci
1. Pobuđen crvenom ili infracrvenom svjetlošću, raspršivanje svjetlosti je malo, a raspršivanje malih čestica je obrnuto proporcionalno četvrtom stepenu talasne dužine.
2. Više rasutih fotona iz poprečnog presjeka slike može se prikupiti bez potrebe za rupicama.
3. Rupe ne mogu razlikovati raspršene fotone emitirane iz defokusiranih ili fokalnih područja, a višefotoni imaju bolji omjer signala i šuma u dubokoj slici.
4. Ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za jednofotonsko pobuđivanje lako se apsorbira i prigušuje od strane uzorka prije nego snop stigne do žarišne ravni, što otežava pobuđivanje dubokih slojeva.
5. U smislu biološkog mikroskopskog posmatranja, prva pažnja je da se ne ošteti aktivno stanje samog organizma, održava cirkulacija vode, koncentracija jona, kiseonika i hranljivih materija. U polju posmatranja svjetlosti, i toplinska i fotonska energija moraju ostati unutar doze zračenja i svjetlosne energije koje ne oštećuju ćelije.
6. Multifotonska mikroskopija ima mnoge prednosti. Što se tiče trodimenzionalne rezolucije, invazije dubine, efikasnosti raspršenja, pozadinskog svjetla, odnosa signal-šum, kontrole, itd., postoje karakteristike koje prethodni laserski mikroskopi ne posjeduju ili ne mogu nadmašiti
Nedostaci višefotonskog laserskog skenirajućeg mikroskopa:
1. Samo za fluorescentno snimanje.
2. Ako uzorak sadrži hromofore koji mogu apsorbirati ekscitacijsko svjetlo, uzorak može biti podvrgnut termičkom oštećenju.
3. Rezolucija je malo smanjena, iako se može poboljšati istovremenom upotrebom konfokalnih malih rupa, dolazi do gubitka signala.
4. Zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
