Uvod u prednosti i nedostatke višefotonskih laserskih skenirajućih mikroskopa
Prednosti višefotonskog laserskog skenirajućeg mikroskopa:
1. Pobuđen crvenom ili infracrvenom svjetlošću, raspršivanje svjetlosti je malo, a raspršivanje malih čestica je obrnuto proporcionalno četvrtom stepenu talasne dužine.
2. Više rasutih fotona iz poprečnog presjeka slike-može se prikupiti bez potrebe za rupicama.
3. Rupice ne mogu razlikovati raspršene fotone emitirane iz defokusiranih ili fokalnih područja, a višefotoni imaju bolji omjer signala-/{2}}u dubokoj slici.
4. Ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za jednofotonsko pobuđivanje lako se apsorbira i prigušuje od strane uzorka prije nego snop dostigne fokalnu ravan, što otežava pobuđivanje dubokih slojeva.
5. U smislu biološkog mikroskopskog posmatranja, prva pažnja je da se ne ošteti aktivno stanje samog organizma, održava cirkulacija vode, koncentracija jona, kiseonika i hranljivih materija. U polju posmatranja svjetlosti, i toplinska i fotonska energija moraju ostati unutar doze zračenja i svjetlosne energije koje ne oštećuju ćelije.
6. Multifotonska mikroskopija ima mnoge prednosti. U smislu trodimenzionalne rezolucije, dubinske invazije, efikasnosti raspršenja, pozadinskog svjetla, odnosa signala-i-šuma, kontrole, itd., postoje karakteristike koje prethodni laserski mikroskopi ne posjeduju ili ne mogu nadmašiti
Nedostaci višefotonskog laserskog skenirajućeg mikroskopa:
1. Samo za fluorescentno snimanje.
2. Ako uzorak sadrži hromofore koji mogu apsorbirati pobuđujuću svjetlost, uzorak može biti podvrgnut termičkom oštećenju.
3. Rezolucija je malo smanjena, iako se može poboljšati istovremenom upotrebom konfokalnih malih rupa, dolazi do gubitka signala.
4. Zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
