Uvod u prednosti i nedostatke višefotonskog laserskog skenirajućeg mikroskopa
Prednosti višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije:
1. Pobuđen crvenim ili infracrvenim svjetlom, raspršivanje svjetlosti je malo, a raspršivanje malih čestica je obrnuto proporcionalno četvrtom stepenu talasne dužine.
2. Više rasutih fotona iz sekcije za snimanje može se prikupiti bez rupica.
3. Pinhole ne može razlikovati raspršene fotone emitirane iz područja izvan fokusa ili područja fokusa, a omjer signala i šuma višefotonskog snimanja u dubokim slojevima je dobar.
4. Ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za jednofotonsko pobuđivanje lako se apsorbira i prigušuje od strane uzorka prije nego snop stigne do žarišne ravni, a nije lako pobuditi duboke slojeve.
5. U smislu posmatranja biološkog mikroskopa, prva pažnja je da se ne ošteti aktivno stanje samog organizma i da se održi cirkulacija vode, koncentracije jona, kiseonika i hranljivih materija. U slučaju promatranja svjetlosti, i toplina i energija fotona moraju ostati unutar količine zračenja i svjetlosne energije koja neće oštetiti ćelije.
6. Multifotonska mikroskopija ima mnoge prednosti. Kao što su trodimenzionalna rezolucija, duboka penetracija, efikasnost raspršenja, pozadinsko svjetlo, omjer signal-šum, kontrola, itd., svi imaju karakteristike koje prethodni laserski mikroskopi nisu imali ili nisu mogli nadmašiti.
Nedostaci višefotonske laserske skenirajuće mikroskopije:
1. Samo za fluorescentno snimanje.
2. Ako uzorak sadrži hromofore koji apsorbuju pobudno svjetlo, uzorak može biti termički oštećen.
3. Rezolucija je malo smanjena. Iako se može poboljšati korištenjem konfokalnog otvora u isto vrijeme, signal se gubi.
4. Zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera, cijena višefotonskog skenirajućeg mikroskopa je relativno visoka.
