Mjerenje volumena blokova tkiva pomoću bioloških mikroskopa
Do sada su kriofiksacija, zamrznuto ultra-tanko sečenje i sušenje zamrzavanjem{1}} rutinske metode za rendgensku mikroskopiju tkiva i ćelija. Molimo navedite sljedeće detalje u vezi sa ovom metodom:
Biološki mikroskop sa reflektorom može pomicati reflektor gore i dolje kako bi se postigao umjereni sjaj, a otvor promjenjivog otvora blende se također može promijeniti kako bi se postigla umjerena svjetlina. Ako svjetlost dolazi od sunca, reflektor se može podići na odgovarajući način i otvor promjenjivog svjetla može se na odgovarajući način povećati. Ako je svjetlo prejako, reflektor se može spustiti na odgovarajući način, a otvor raskrsnice se može na odgovarajući način smanjiti. Ako se i dalje osjećate sjajno u ovoj situaciji, možete odabrati da postavite odgovarajući filter na nosač ispod reflektora. Ovaj hrast može postići sjaj koji vas zadovoljava. Naravno, podešavanjem gornjeg i donjeg položaja reflektora može se promijeniti veličina otvora za očitavanje svjetla i odabir odgovarajućih filtera, što zahtijeva određeni period prakse i iskustva.
Veoma važno pitanje u biološkoj mikroskopiji je proces uzorkovanja i izolacije ćelija. Nakon -sušenja smrzavanjem i ugradnje smole (FD), smrznuti ultra-prorezi moraju se pažljivo obraditi kako bi se osiguralo da sadržaj od 65 elemenata svakog dijela nije oštećen tokom posmatranja i analize. Zbog brojnih koraka i visoke cijene mikroanalize X-, žalosno je donijeti pogrešne zaključke ako su analizirane ćelije oštećene ili mrtve nakon dužeg i više{6}}stepenog procesa obrade. Ćelije miokarda odvojene tretmanom želatinazom imaju dva oblika, jedan je u obliku dugačke šipke-, a drugi je kružnog oblika. Potonje se odnosi na umiruće ćelije koje su oštećene tokom procesa razdvajanja ćelija.
Sadržaj i distribucija elektrolita u ova dva tipa ćelija su veoma različiti pod biološkim mikroskopom. Na je vrlo visok, a K izuzetno nizak u kružnim kardiomiocitima, a koncentracija Ca u linearnim dendritima je vrlo visoka. Nakon provjere drugim analitičkim metodama, dokazano je da su visoki Na i nizak K u cirkularnim stanicama i visoki Ca u mitohondrijima rezultat oštećenja membrane prilikom razdvajanja stanica. Metoda hladne fiksacije za ćelije i tkiva često uključuje prvo gašenje, a zatim njihovo skladištenje u tekućem dušiku. Fiksacija gašenja je ključna za efekat očuvanja. Žive ćelije ili svježa tkiva su bogata vodom, a kada se ugase, dijelovi ćelija ili tkiva koji dolaze u direktan kontakt sa rashladnim sredstvom (posebno kada se koristi tečni dušik za hlađenje) često se prvo zamrzavaju i fiksiraju, formirajući "ljusku" koja sprječava drobljenje i fiksiranje središnjeg dijela ćelija. Zbog toga se prilikom rendgenske mikroanalize često nađe da kristali leda postoje u centralnom dijelu većih ćelija. Kako bi se spriječila ova situacija, kao rashladno sredstvo se koristi supstanca s tačkom topljenja višom od tekućeg dušika, ali nižom za 806c. Postoji mnogo ovih supstanci, ali ih je lako nabaviti, a najpovoljniji je koncentrovani propan (tačka ključanja 42,120c, tačka topljenja 187,10c, molekulska težina 44,1), koji takođe ima brzu brzinu hlađenja. Ali njegov nedostatak je što je zapaljiv.
