Zahtjevi za debljinu optičkog mikroskopa za staklene pločice
Mikroskopska dehidracija i pričvršćivanje uzorka: Zbog ponovljenog centrifugiranja, ćelije se gube, pa je najbolje pričvrstiti ćelije na površinu staklenog stakalca ili plastične ploče za optičku mikroskopiju, tako da se ćelije dehidriraju i osuše zajedno sa staklom. tobogan ili plastični lim. Zahtjevi za debljinu staklenih pločica u optičkoj mikroskopiji Da bi se ćelije mogle pričvrstiti na stakalce ili plastične listove, potrebno je prvo postaviti sloj filma na staklena stakla ili plastične ploče. Metoda polaganja filma je sljedeća:
(1) Najjednostavniji metod za optičku mikroskopiju je polaganje tankog sloja polivinil formalnog (formvar) filma. Potopite očišćene stakalce u (0.5-1) postotnu otopinu polivinil formalnog kloroforma. Nakon što se atmosfera ispari, na slajdovima se pojavljuje bijeli film. Protresite stakalce nekoliko puta u hloroformu kako bi se film promijenio. Tanak i spreman za upotrebu.
(2) Ispustite 0.1 latitude poli-L-lizin (otopiti 1 mg poli-lizina u 1 ml filtrirane vode tokom pripreme) na očišćeno staklo i stavite ga u kutiju za dovod na 450C nakon što se kapljica otvori . suho. Ova metoda je najbolja jer je poli-L-lizin pozitivno nabijen, što omogućava da se veže više površinski negativno nabijenih ćelija.
(3) Dodajte plazmu i glicerol u destilovanu vodu u omjeru (30--40) posto i (3-5) posto u skladu sa zahtjevima optičkog mikroskopa za debljinu stakalca kako bi se formirao glicerol protein rješenje. Tečnost se ukapa na očišćeno staklo, rasklopi i osuši pod optičkim mikroskopom. Položeni proteinski film je uronjen u 2 posto glutaraldehida da se protein fiksira, opere i osuši za kasniju upotrebu. Prije upotrebe, plazma se kapne na proteinski film. Učinite ga "aktiviranim", isperite puferom nakon 30 minuta i može se direktno nanijeti.
Fiksirane i očišćene ćelije se prave u odgovarajućoj koncentraciji ćelijske suspenzije sa filtriranom vodom pod digitalnim mikroskopom, a optički mikroskop se stavlja na staklo ili plastični lim koji je prekriven membranom i stavlja u vlažnu, nisku temperatura (40C) okruženje (30-120) minuta kako bi se ćelije mogle pričvrstiti na membranu. Upotrijebite finu pincetu da pokupite predmetno staklo i protresite ga u čistoj dvostruko destilovanoj vodi, a nevezane ćelije isperite optičkim mikroskopom. Zahtjevi za debljinu stakala u optičkim mikroskopima Polarizacijski mikroskopi se zatim brzo stavljaju u posudu napunjenu 50 posto acetona (ili etanola). Proces dehidracije je stavljanje staklenih pločica u aceton ili etanol sa povećanjem koncentracije svake 3 minute, a optički mikroskop ili kontinuirano povećanje koncentracije sredstva za dehidraciju u staklenom predmetu. Prema laboratorijskom iskustvu autora, ova potonja operacija je praktičnija. Specifičnom metodom optičke mikroskopije može se svake 3 minute usisati polovinu sredstva za dehidrataciju u posudi, a zatim dodati jednaku količinu sredstva za dehidrataciju u koncentraciji od 100 posto. Nakon 5-6 operacija, koncentracija sredstva za dehidraciju u posudi za cijenu mikroskopa dostiže iznad 0,5 posto, a ćelije se uspješno dehidriraju. Nakon sušenja na kritičnoj tački, staklo ili plastični lim se lijepi na nosač uzorka provodljivim ljepilom za metalni premaz. Postoje i pogodnosti za pričvršćivanje ćelija na membrane postavljene trećom metodom. Optički mikroskop može objesiti ćelije fiksirane niskom koncentracijom glutaraldehida na "aktivirani" proteinski film. Optički mikroskop zahtijeva da se staklena pločica u debljini stavi na 10 minuta, a staklena pločica ili plastični lim se natopi u 2 posto glutaraldehida. Nakon 30 minuta isperite filtriranom dvostruko destilovanom vodom, a zatim dehidrirajte, osušite i premažite prema gore navedenoj metodi.
