PH metar - Određivanje i podešavanje pH medija
Na sve mikroorganizme utiče pH sredine u kojoj žive. Često, prisustvo selektivnih vrsta sužava pH raspon u kojem rastu. Ponekad kiselost ili alkalnost medijuma takođe može delovati kao faktor selekcije rasta. Za biohemijske testne podloge, međutim, pH raspon u kojem mikroorganizmi pokazuju tk aktivnost u supstratu je uži od pH raspona potrebnog za rast: stoga je važno podesiti pH podloge na očekivani raspon. Kada laboratorija priprema medijum prema sastavu medijuma, pH se mora proveriti i podesiti. Mora se naglasiti da čak i za gotov sintetički dehidrirani medij koji je osigurao proizvođač (posebno za neke osnovne dehidrirane podloge), konačni pH treba izmjeriti nakon izrade eksperimentalnog medija.
Najprecizniji način mjerenja pH medija je pH metar. Prije upotrebe, mora se kalibrirati sa standardnom puferskom otopinom poznatog pH (obično je pH 4 do 7). Isperite elektrodu pH metra destilovanom vodom i uronite je u medijum za kulturu u čaši, a zatim očitajte pH medijuma za kulturu sa skale pH metra. Svaki proizvođač daje detaljna uputstva za upotrebu za svaki tip pH metra.
Prilikom pripreme medijuma za kulturu, pH se može lako podesiti korišćenjem pH metra uz mehaničko mešanje. Podlogu za kulturu treba pripremiti u posudi (kao što je velika čaša) koja se može neprekidno miješati. ili magneti omotani teflonom. pH medijuma koji sadrži agar potrebno je podesiti nakon odmrzavanja, što se lako radi pomoću magnetne mešalice koja se može zagrejati. Kada podešavate pH, koristite standardni puferski rastvor poznatog pH da biste prvo kalibrirali pH metar. Zatim stavite kompozitnu elektrodu i otporni termometar (ako postoji) u medijum, polako dodajte odgovarajuću količinu hlorovodonične kiseline i natrijum hidroksida sa kraja čaše dalje od elektrode, tako da medij može dostići i održavati potrebnu pH vrednost.
Temperaturna kompenzacija pH metra treba da uzme u obzir uticaj temperature na sistem elektroda: u nekim razblaženjima i medijima, pH se značajno menja sa temperaturom. Za tečne medije i razblaženja, pH se obično može podesiti i meriti na 25 stepeni ili na temperaturi na kojoj se koriste.
pH agar podloge se mora podesiti nakon rastvaranja, a temperatura rastvaranja je iznad 45 stepeni: stoga pH čvrstog medijuma treba odrediti na temperaturi njegove upotrebe. U ovom trenutku treba koristiti ravnu kompozitnu elektrodu, a temperaturnu kompenzaciju pH metra treba ručno kalibrirati. Prilikom pripreme podloge za kulturu, ako se utvrdi da je pH medijuma za kulturu različit između stanja topljenja i stanja očvršćavanja, to znači da je došlo do greške u podešavanju pH vrednosti.
Slično, kada se pripremljeni medij sterilizira toplinom (npr. autoklavira), on također može podvrgnuti promjenama pH. Za dehidrirani medij, proizvođač je to uzeo u obzir i obično nema potrebe za podešavanjem pH, ali treba pažljivo provjeriti pH medija koji se koristi. Ako se pH dehidrirane agar podloge mora podesiti tijekom ponovnog otapanja ili pripreme, najbolje je podesiti ga filtriranom steriliziranom hlorovodoničnom kiselinom i otopinom natrijum hidroksida nakon koraka sterilizacije kako bi se izbjeglo stvaranje pregrijavanja podloge. Kada se priprema podloga s različitim sirovinama ili farmaceutskim proizvodima, pH medija mora se provjeriti nakon autoklaviranja. Osim toga, ako se utvrdi da se pH medija mijenja nakon svakog autoklava, pH se može podesiti na odgovarajući način prilikom pripreme medija. Međutim, još uvijek je potrebno odrediti konačni pH podloge nakon sterilizacije.
