Priprema i posmatranje bioloških uzoraka za elektronske mikroskope
Rezolucija mikroskopa zavisi od talasne dužine svetlosti koja se koristi. Elektronski mikroskop, koji se pojavio 1933. godine, postigao je znatno veću rezoluciju od optičkog mikroskopa zahvaljujući korištenju elektronskih snopova s valnim dužinama mnogo kraćim od vidljive svjetlosti kao izvora svjetlosti. Različiti izvori svjetlosti također određuju niz razlika između elektronskih i optičkih mikroskopa.
Na osnovu razlika u principima snimanja elektronskih zraka i načina na koji oni djeluju na uzorke, moderni elektronski mikroskopi su se razvili u mnoge vrste. Trenutno se najčešće koriste transmisioni elektronski mikroskopi i skenirajući elektronski mikroskopi. Prvi ima ukupno povećanje koje može varirati između 1000-10000000 puta, dok drugi ima ukupno povećanje koje može varirati između 20-300000 puta. Ovaj eksperiment uglavnom uvodi pripremu dvije vrste mikroskopskih uzoraka, transmisijske elektronske mikroskopije i skenirajuće elektronske mikroskopije.
2, Oprema
1. Soj Escherichia coli je nagnut.
2. Rastvor ili reagens: pentil acetat, koncentrovana sumporna kiselina, anhidrovani etanol, sterilna voda, 2% vodeni rastvor natrijum fosfotungstata (pH 6,5-8,0), 0,3% polivinil formaldehid (otopljen u hloroformu), rastvor citohroma 2 m 2 BR3
3. Instrumenti ili drugi alati uključuju obične optičke mikroskope, bakarne mreže, porculanske lijeve, čaše, petrijeve posude, sterilne kapaljke, sterilne pincete, igle, staklene pločice, ploče za brojanje, mašine za vakuumsko oblaganje, sušare za kritičnu tačku itd.
3, Operativni koraci
(1) Priprema i posmatranje uzoraka za transmisijsku elektronsku mikroskopiju
1. Tretman metalne mreže
Uzorak optičkog mikroskopa stavlja se na staklo za posmatranje. Međutim, u transmisijskom zrcalu, budući da elektroni ne mogu prodrijeti kroz stakleni lim, mrežasti materijal se može koristiti samo kao nosač, koji se obično naziva noseća mreža. Noseća mreža se može podijeliti na različite specifikacije zbog različitih materijala i oblika, među kojima se najčešće koristi bakrena mreža sa 200-400 mesh (broj rupa). Bakrenu mrežu treba tretirati prije upotrebe kako bi se uklonila sva prljavština i održala čista, inače će utjecati na kvalitetu potpornog filma i jasnoću fotografija uzorka. Bakrena mreža od 400 mesh korištena u ovom eksperimentu može se tretirati sljedećom metodom: prvo, natopite i plivajte s pentil acetatom nekoliko sati, zatim isperite nekoliko puta destilovanom vodom i na kraju uronite i plivajte bakrenu mrežicu u bezvodnom etanolu radi dehidracije. Ako bakrena mreža i dalje nije čista nakon gore navedenih metoda, može se potopiti u razrijeđenu koncentriranu sumpornu kiselinu (1:1) 1-2 minute ili prokuhati u 1% otopini NaOH nekoliko minuta, isprati nekoliko puta destiliranom vodom, a zatim dehidrirati u bezvodnom etanolu za kasniju upotrebu.
