Zahtjevi za pripremu fluorescentnih mikroskopskih stakalca
(1) Stakleni tobogan
Debljina klizača treba biti između 0.8 i 1.2mm. Ako je klizač predebeo, s jedne strane, on će apsorbirati više svjetla, a s druge strane neće dozvoliti da se pobudna svjetlost skupi na uzorku. Stakalna pločica mora biti glatka, ujednačene debljine i bez očigledne spontane fluorescencije. Ponekad su potrebni dijapozitivi od kvarcnog stakla.
(2) Poklopac stakla
Debljina pokrovnog stakla je oko 0.17 mm i glatko je. Kako bi se pojačalo pobudno svjetlo, može se koristiti i interferentno pokrivno staklo. Ovo je posebno dizajnirano pokrovno staklo sa nekoliko slojeva supstanci (kao što je magnezijum fluorid) koje imaju različite efekte interferencije na svetlost različitih talasnih dužina. Može dozvoliti da fluorescencija nesmetano prolazi, dok reflektirajuća pobuđena svjetlost može uzbuditi uzorak.
(3) Primerak
Kriške tkiva ili drugi uzorci ne bi trebali biti previše debeli. Ako su predebele, najveći dio ekscitacijske svjetlosti se troši u donjem dijelu uzorka, dok gornji dio koji direktno posmatra sočivo objektiva nije u potpunosti pobuđen. Osim toga, preklapanje ćelija ili maskiranje nečistoća može utjecati na prosuđivanje.
(4) Sredstvo za zaptivanje
Kao sredstvo za montažu najčešće se koristi glicerin, koji ne smije imati spontanu fluorescenciju, bezbojan i providan. Svjetlina fluorescencije je relativno jaka na pH 8.5-9.5 i nije lako brzo nestati. Stoga se kao sredstvo za zaptivanje obično koristi jednaka mješavina glicerola i 0.5mol/L karbonatnog pufera sa pH 9.0-9.5.
(5) Ulje za ogledalo
Kada koristite fluorescentni mikroskop tamnog polja i uljni mikroskop za posmatranje uzoraka, mora se koristiti ulje za ogledalo. Može se koristiti specijalno nefluorescentno ulje za ogledalo, ili se kao zamjena može koristiti glicerol. Može se koristiti i tekući parafin, ali je indeks loma nizak i ima blagi utjecaj na kvalitetu slike.
