Nekoliko problema u korištenju faznokontrastne mikroskopije:
(1) Preokret faze kada n '
(2) Halo i efekt postepenog zatamnjivanja u procesu snimanja faznokontrastne mikroskopije, kada struktura postaje tamnija zbog kašnjenja faze, nije gubitak svjetlosti, već rezultat preraspodjele svjetlosti na ravni slike. Stoga će svjetlost koja jasno nestaje u tamnim područjima izgledati kao svijetli oreol oko tamnijih objekata. To je nedostatak faznokontrastne mikroskopije, koja otežava uočavanje finih struktura. Kada je prstenasti otvor veoma uzak, fenomen haloa je ozbiljniji. Još jedan fenomen faznokontrastne mikroskopije je efekat zatamnjenja, koji se odnosi na smanjenje kontrasta na ivicama veće površine sa istim faznim kašnjenjem uočenim tokom posmatranja faznog kontrasta.
(3) Uticaj debljine uzorka Kada se posmatra razlika, debljina uzorka treba da bude 5 μm ili tanja. Kada se koriste deblji uzorci, gornji sloj uzorka je čist, dok će dublji sloj biti mutan i proizvoditi smetnje faznog pomaka i smetnje raspršivanja svjetlosti.
(4) Utjecaj pokrivnog stakla i klizača na uzorak mora biti prekriven pokrivnim staklom, inače se svijetli prsten prstenastog otvora i tamni prsten fazne ploče teško preklapaju. Diferencijalno promatranje također ima visoke zahtjeve za kvalitetom stakla kliznog i pokrovnog stakla. Kada postoje ogrebotine, nejednaka debljina ili neravnine, to može uzrokovati izobličenje svijetlog prstena i fazne smetnje. Osim toga, ako je staklo predebelo ili pretanko, to će uzrokovati da prstenasti otvor postane veći ili manji.
Trenutno su optički mikroskopi evoluirali od tradicionalnih bioloških mikroskopa do različitih tipova specijalizovanih mikroskopa. Prema njihovim principima snimanja, mogu se podijeliti na:
① Geometrijski optički mikroskop: uključujući biološki mikroskop, mikroskop padajućeg svjetla, invertni mikroskop, metalografski mikroskop, mikroskop tamnog polja, itd.
② Fizički optički mikroskop: uključujući fazni kontrastni mikroskop, polarizacijski mikroskop, interferentni mikroskop, fazno-kontrastni polarizacijski mikroskop, fazni kontrastni interferentni mikroskop, faznokontrastni fluorescentni mikroskop itd.
③ Mikroskopi za konverziju informacija: uključujući fluorescentne mikroskope, mikrospektrometre, mikroskope za analizu slike, akustične mikroskope, fotografske mikroskope, televizijske mikroskope, itd.
Navedite nekoliko upotreba mikroskopa: a Biološki mikroskop: Općenito govoreći, mikroskopi se mogu podijeliti na stereo mikroskope i biološke mikroskope. Zbog različitih namjena i zahtjeva, pojavile su se mnoge grane, ali osnovni principi ostaju isti. Polarizacija, fazni kontrast, transmisija i padajuće svjetlo još uvijek se klasificiraju kao biološki mikroskopi. Stereoskopski mikroskop, poznat i kao anatomski mikroskop, čvrsti mikroskop i stereo mikroskop, je svestran mikroskop. Jednostavan je za rukovanje, ima male zahtjeve za uzorke, ima veliku radnu udaljenost i ima snažan osjećaj za trodimenzionalnost pri posmatranju. Može se koristiti za promatranje fizičkih objekata ili obavljanje nekih operacija na uzorcima tijekom promatranja. Umjesto rezanja uzorka poput biološkog mikroskopa, za rezanje je potrebna odgovarajuća tehnologija i oprema. Stoga, stereo mikroskopi imaju širok spektar primjena u oblastima kao što su mikroelektronika, precizna montaža i održavanje instrumenata i mikro graviranje. Široko korišćen u anatomiji i mikrohirurgiji u oblastima biologije i medicine (trenutno klasifikovani kao hirurški mikroskopi), izvor svetlosti koji se koristi u biologiji i medicini može biti samo izvor hladnog svetla (optička vlakna); Koristi se u industriji za posmatranje, montažu, inspekciju i druge radove malih delova i integrisanih kola. Metalografski mikroskop: Mnogi ljudi vole da ga pišu kao "metalografski mikroskop". Metalografski mikroskop je mikroskop koji se posebno koristi za posmatranje metalografske strukture neprozirnih objekata kao što su metali i minerali. Ovi neprozirni objekti se ne mogu posmatrati u običnom transmisionom mikroskopu, tako da je glavna razlika između njih i običnog mikroskopa u tome što prvi koristi reflektovanu svjetlost, dok drugi koristi propušteno svjetlo za osvjetljavanje. U metalografskom mikroskopu, svjetlosni snop se usmjerava od sočiva objektiva do površine promatranog objekta, odbija se od površine, a zatim se vraća u sočivo objektiva radi snimanja. Ova metoda reflektivnog osvjetljenja također se široko koristi u detekciji silikonskih pločica integriranog kola.
