Prednosti i ograničenja višefotonskih laserskih skenirajućih mikroskopa
Prednosti su sljedeće:
1. Pobuđen crvenim ili infracrvenim svjetlom, raspršivanje svjetlosti je malo (rasipanje malih čestica je obrnuto proporcionalno četvrtom stepenu talasne dužine).
2. Nema potrebe za rupicama, može prikupiti više raspršenih fotona iz poprečnog-presjeka slike.
3. Rupice ne mogu razlikovati raspršene fotone emitirane iz defokusiranih ili fokalnih područja, a višefotoni imaju bolji omjer signala-/{2}}u dubokoj slici.
4. Ultraljubičasto ili vidljivo svjetlo koje se koristi za jednofotonsko pobuđivanje lako se apsorbira i prigušuje od strane uzorka prije nego snop dostigne fokalnu ravan, što otežava pobuđivanje dubokih slojeva.
5. U smislu biološkog mikroskopskog posmatranja, prva pažnja je da se ne ošteti aktivno stanje samog organizma i da se održi cirkulacija vode, koncentracije jona, kiseonika i hranljivih materija. U polju posmatranja svjetlosti, i toplinska i fotonska energija moraju ostati unutar doze zračenja i svjetlosne energije koje ne oštećuju ćelije.
6. Multifotonska mikroskopija također ima mnoge prednosti. U smislu trodimenzionalne rezolucije, dubinske invazije, efikasnosti raspršenja, pozadinskog svjetla, odnosa signala-i-šuma, kontrole, itd., laserski mikroskopi imaju neusporedive ili superiorne karakteristike koje prethodni laserski mikroskopi nisu posjedovali.
Višefotonski konfokalni laserski skenirajući mikroskop proširen je na različita polja istraživanja i primjene. Može izvoditi trodimenzionalno ne-nedestruktivno posmatranje uzoraka u njihovom prirodnom stanju i poboljšati rezoluciju i odnos signala-i-šuma sistema Koristeći promjene u svojstvima materijala nakon višefotonske{4} pohrane podataka o visini} Može se postići i trodimenzionalna mikrofabrikacija u bilo kojem smjeru, koja ima visoku primjenu. Može se vjerovati da će daljim razvojem mehaničkih, materijalnih i laserskih tehnologija vezanih za multifotonsku konfokalnu mikroskopiju, višefotonska konfokalna laserska skenirajuća mikroskopija imati veći razvoj i širu primjenu
Nedostaci su sljedeći:
1. Samo za fluorescentno snimanje.
2. Ako uzorak sadrži hromofore koji mogu apsorbirati ekscitacijsko svjetlo, kao što su pigmenti, uzorak može biti podvrgnut termičkom oštećenju.
3. Rezolucija je malo smanjena, iako se može poboljšati istovremenom upotrebom konfokalnih malih rupa, doći će do gubitka signala.
4. Zbog ograničenja skupih ultrabrzih lasera, cijena višefotonskih skenirajućih mikroskopa je relativno visoka.
