Dva najčešće primijenjena posmatračka pristupa za mikroskope
1, Opservacija tamnog polja
Tamno vidno polje je zapravo osvjetljenje tamnog polja. Njegove karakteristike se razlikuju od svijetlog vidnog polja, jer ne promatra direktno svjetlo koje osvjetljava, već promatra reflektiranu ili difrakcijsku svjetlost objekta koji se pregleda. Dakle, vidno polje postaje tamna pozadina, dok predmet koji se pregledava predstavlja svijetlu sliku.
Princip tamnog polja temelji se na optičkom Tyndallovom fenomenu, gdje ljudsko oko ne može uočiti čestice prašine kada su izložene jakoj svjetlosti zbog difrakcije uzrokovane jakom svjetlošću. Ako se svjetlost koso projektuje na nju, čini se da čestice povećavaju volumen zbog refleksije svjetlosti, što ih čini vidljivim ljudskom oku.
Poseban dodatak potreban za promatranje tamnog polja je reflektor tamnog polja. Njegova karakteristika je da ne dozvoljava snopu svjetlosti da prođe kroz objekt odozdo prema gore, već mijenja putanju svjetlosti tako da bude koso usmjerena prema objektu, tako da svjetlo osvjetljenja ne ulazi direktno u sočivo objektiva, i koristi svijetlu sliku formiranu refleksijom ili difrakcijom svjetlosti koja se nalazi na površini osmatranja koja je mnogo veća od površine tamnog polja koja se nalazi na tamnom polju. osmatranja svijetlog polja, dostižući do 0,02-0,004
2, Metoda inspekcije ogledala faznog kontrasta
Uspješan pronalazak faznokontrastne mikroskopije u razvoju optičkih mikroskopa je važno dostignuće u modernoj mikroskopskoj tehnologiji. Znamo da ljudsko oko može razlikovati samo talasnu dužinu (boju) i amplitudu (svjetlost) svjetlosnih valova. Za bezbojne i prozirne biološke uzorke, kada svjetlost prolazi, talasna dužina i amplituda se ne mijenjaju mnogo, što otežava promatranje uzorka u svijetlom polju
Mikroskop faznog kontrasta koristi razliku u dužini optičke putanje objekta koji se pregleda za pregled ogledala, efektivno koristeći fenomen interferencije svetlosti da transformiše faznu razliku koju ljudsko oko ne može razlikovati u razliku amplitude. Čak i bezbojne i prozirne supstance mogu postati jasno vidljive Ovo uvelike olakšava posmatranje živih ćelija, stoga se faznokontrastna mikroskopija široko koristi u invertnim mikroskopima
Osnovni princip fazno-kontrastne mikroskopije je pretvaranje optičke razlike putanje vidljive svjetlosti koja prolazi kroz uzorak u amplitudnu razliku, čime se poboljšava kontrast između različitih struktura i čini ih jasnim i vidljivim. Nakon prolaska kroz uzorak, svjetlost prolazi kroz refrakciju, odstupajući od originalne optičke putanje i kasni za 1/4 λ (valna dužina). Ako se razlika optičke putanje poveća ili smanji za još 1/4 λ, razlika optičke putanje postaje 1/2 λ, a interferencija između dva svjetlosna snopa se povećava ili smanjuje nakon što se osovina kombinuje, poboljšavajući kontrast U pogledu strukture, mikroskopi faznog kontrasta imaju dvije posebne razlike od običnih optičkih mikroskopa:
1. Između izvora svjetlosti i kondenzatora nalazi se prstenasta dijafragma, a njena funkcija je da formira šuplji stožac svjetlosti koji prolazi kroz kondenzator i fokusira se na uzorak
2. Ugaona fazna ploča: Fazna ploča obložena magnezijum fluoridom se dodaje na sočivo objektiva, što može odgoditi fazu direktne ili difraktirane svjetlosti za 1/4 λ. Može se podijeliti u dvije vrste:
(1) . A+fazna ploča: odgodite direktnu svjetlost za 1/4 λ i dodajte dva seta svjetlosnih valova nakon kombiniranja osi. Amplituda se povećava, a struktura uzorka postaje svjetlija od okolnog medija, formirajući svijetli kontrast (ili negativan kontrast)
(2) . B+fazna ploča: Odgodite difrakciju svjetlosti za 1/4 λ i oduzmite svjetlosne valove nakon kombiniranja osa dva seta svjetlosnih zraka, što rezultira smanjenjem amplitude i formiranjem tamnog kontrasta (ili pozitivnog kontrasta). Struktura postaje tamnija od okolnog medija
